Слайд 1Правила оформления тестового контроля
На отдельном листе бумаги написать:
Учебная дисциплина: Микробиология
Тема тестового контроля: Организация бактериологической лаборатории. Красители, простые методы окраски.
Группа:
написать номер
Студент: написать фамилию и имя
Ответы на вопросы: написать номер вопроса и правильный вариант ответа. Например: 1D.
Под ответами: поставить дату (число, месяц, год) и личную подпись.
Слайд 2Модуль 2.
Тестовый контроль по теме №2:
Методы культивирования вирусов.
Индикация вирусной
репродукции.
Слайд 31. Цитотропизм вирусов это их способность:
A. Накапливаться в цитоплазме;
B. Поражать лишь определенный тип клеток
C. К облигатному паразитизму
в клетках
D. Реплицироваться только в клетках
2. Внутриклеточные включения, которые обусловлены развитием вируса бешенства, называются:
А. Тельца Фатера-Пачини
B. Тельца Гварниери
C. Тельца Бабеша-Негри
D. Тельца Жолли
Слайд 43. При выделении нейротропных вирусов (бешенства, полиомиелита, Коксаки) целесообразно заражать
в мозг животных:
A. Мышат-сосунцов
B. Крыс
C. Морских свинок
D. Кроликов
4. Оптимальный возраст куриного эмбриона для культивирования (выделения, накопления) вируса гриппа составляет:
А. 5-6 суток
B. 8-9 суток
C. 10-11 суток
D. 12-14 суток
Слайд 55. Заражение куриного эмбриона при выделении вируса гриппа проводят:
A.
На хорионаллантоисную оболочку
B. В аллантоисную полость и амнион
C.
В желточный мешок
D. В тело или глаз эмбриона
6. Признаки вирусной репродукции в курином эмбрионе:
A. Гибель и нарушение развития эмбриона
B. Вирусные поражения (бляшки, оспины и др.) на хорионаллантоисной оболочке
C. Положительная РГА с аллантоисной жидкостью
D. Положительный результат выявления ДНК или РНК вирусов методом ПЦР
Слайд 67. Неограниченным, стабильным ростом и пермиссивностью характеризуются культуры клеток:
A. Первично-трипсинизированные
B.
Перевиваемые
C. Диплоидные
D. Органные
8. По функциональному назначению пита-тельные среды
для культур клеток делят на:
A. Ростовые среды
B. Среды поддержки
C. Естественные
D. Ферментативные
Е. Искусственные
Слайд 79. Признаки репликации вирусов в культуре клеток:
A. Цитопатическое действие
B.
Внутриклеточные включения
C. Бляшкообразование
D. Цветная проба
Е. РГА,
РГадс
10. Аденовирусы вызывают частичную дегенерацию культуры клеток с ЦПД типа:
A. Полного пикноза
B. Симпластообразования
C. Гроздьеобразования
D. Очаговой деструкции
Слайд 811. Для идентификации вирусов, выделенных методом культуры клеток, наиболее часто
применяют серологические реакции:
A. РТГА
B. РН
C. РТГадс
D. РСК
Е. Другие
12. Для определения концентрации (титра) вирусов наиболее часто используют метод титрования на основе оценки:
A. РГА D. РСК
B. ЦПД E. ИФА
C. Образования бляшек F. Других реакций
Слайд 9Тема практического занятия: Методы культивирования вирусов. Индикация вирусной репродукции.
ПОХИЛ С.И.
©
Слайд 10Культивирование вирусов
Вирусы размножаются только в живых клетках
и эта способность обусловлена, по-видимому,
тем, что они используют ферментные системы клетки для своего обмена.
Для
культивирования вирусов с целью диагнос-тики заболеваний и для целей изготовления проти-вовирусных специфических препаратов применяет-ся размножение в организме восприимчивых животных (метод впервые применил Л. Пастер в 1881 г.), в курином эмбрионе (метод впервые применен Дж. Гудпасчером в 1931 г.) и культурах клеток (метод впервые применен Дж. Эндерсом и соавт. в 1949 г.). Все методы культивирования вирусов основываются на их клеточном тропизме.
Слайд 11ЦИТОТРОПИЗМ ВИРУСОВ – ЭТО СПОСОБНОСТЬ
ВИРИОНОВ ПОРАЖАТЬ
ЛИШЬ ОПРЕДЕЛЁННЫЙ ТИП КЛЕТОК (ТКАНЕЙ)
КОМПЛЕМЕНТАРНОСТЬ
РЕЦЕПТОРОВ
ВИРИОНА
РЕЦЕПТОРАМ ЦПМ
КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА
СООТВЕТСТВИЕ
МЕТАБОЛИЧЕСКИХ
СВОЙСТВ
КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА
РЕПЛИКАТИВНЫМ
ОСОБЕННОСТЯМ ВИРУСА
ШИРОТА ЦИТОРОПИЗМА РАЗЛИЧАЕТСЯ
ДЛЯ РАЗНЫХ ВИДОВ ВИРУСОВ
Слайд 12Культивирование вирусов в лабораторных животных
Лабораторные животные широко используются в вирусологии
для выделения и идентификации вирусов, получения специфических противовирусных сывороток, изучения
многообразных аспектов патогенеза вирусных заболеваний, разработки способов их диагностики, лечения и профилактики. Чаще всего используют белых мышей разного возраста (сосунков двухдневного возраста), белых крыс, гвинейских свинок, кролей, сусликов, хомяков, хлопчатниковых крыс, мартышек и других.
Слайд 14Виды животных и способы их заражения
Для выделения вирусов используются только
те животные, у которых заражение вирусом приводит к четким клиническим
проявлениям заболевания (в т. ч. их гибели) и патолого-анатомических изменений в органах и тканях. Например, введение в мозг мышам-сосункам зараженного вирусом бешенства материала вызывает у животных проявление болезни: тремор мышц, дискоординация движений, параличи, судороги, гибель; в срезах тканей мозга выявляются тельца Бабеша-Негри. Существуют многообразные способы заражения животных в зависимости от тропизма вирусов, клинической картины заболевания и др.: через рот, в дыхательные пути (ингаля-торно, через нос), накожно, внутрикожно, подкожно, внут-римышечно, внутривенно, внутрибрюшинно, внутрисер-дечно, на скарифицированную роговицу глаза, в мозг и др.
-
Слайд 15Примеры разных способов заражения животных
Для выделения вирусов простого герпеса,
натуральной оспы используют заражение лаборатор-ных животных (кроликов) на скари-фицированную роговицу
глаза.
При исследовании вирусов гепатита А вводят исследуемый материал через рот. При выделении вирусов с нейротропными свойствами, таких как арбовирусы, вирусы бешенства, полиомиелита, Коксаки целесооб-разно заражать белых мышей (1-2-дневных сосунков) в мозг.
Слайд 16Выявление и идентификация вирусов у зараженных животных
Как правило,
через определенное время после
заражения у животных появляются клинические признаки
вирусного заболевания (для многих виру-сных заболеваний они являются характерными). После гибели (или мортализации) животных делают их вскрытие с последующим патологоанатомическим
и патологогистологическим исследованием для выявления изменений, вызванных вирусной инфекцией. Современные методы выявления и идентификации (определения вида, типа) вирусов позволяют определять их в суспензиях отдельных органов и тканей животных (РПГА, РИФ, ИФА, ПЦР) или определять в сыворотке крови животных специфические противовирусные антитела.
Слайд 17Схематический разрез куриного эмбриона на 8 день инкубации
1 - скорлупа;
2 - подскорлупная оболочка;
3 - хорионаллантоисная оболочка;
4 - аллантоисная
полость;
5 - желточный мешок;
6 - белок;
7 - воздушная камера;
8 - тело зародыша;
9 – амнион.
Эмбрионы (или яйца) должны быть получены из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням.
Слайд 18Способы заражения куриного ембриона
При культивировании различных вирусов используют эмбрионы
от 5 суток развития (вирус венесуэльского энцефалита лошадей) до 14
суток развития (вирус натуральной оспы). Оптимальный возраст куриного эмбриона при выделении (накоплении) вируса гриппа -10-11 суток. Способы инфицирования эмбрионов для различных вирусов также отличают-ся. Например, заражение: в аллантоисную полость (а) и амнион (б, в) применяется для вирусов гриппа; в амнион (б, в) – вирусов паротита; на хорионалла-нтоисную оболочку (г) – герпесвирусов и вируса натуральной оспы. Эмбрион может быть заражен в желточный мешок, в вену и мозг.
Слайд 19После заражения эмбрионов их инку-
бируют в термостате определенное время для
размножения вируса, а затем – производят вскритие для индикации вирусной
репродукции.
Признаки вирусной репродукции в курином эмбрионе: гибель и нарушение развития эмбриона; на хорионалантоисной оболочке выявляют вирусные поражения – бляшки, оспины (образуют вирусы гриппа, герпеса и др.); с алантоисной и/или амниотической жидкостью положительная РГА –реакция гемагглютинации (основана на способности некоторых вирусов вызывать склеивание эритроцитов за счет вирусных антигенов – гемагглютининов. Вирусные антигены и нуклеиновые кислоты вирусов в эмбрионе можно выявить серологическими (ИФА, РИФ, РПГА и др.) молекуулярно-генетическими методами (гибридизацией нуклеиновых кислот, ПЦР).
Слайд 20Реакция гемагглютинации (РГА)
РГА - феномен склеивания эритроцитов под воздействием вирусов.
Позитивная реакции - осадок в виде "зонтика", негативная – осадок
в виде "пуговицы".
Слайд 22Культивирование вирусов
в культурах клеток
Под культурой клеток понимают технологию
выращивания клеток (взятых с различных органов и тканей человека или
животных) в условиях in vitro. Наиболее важные условия, которые необходимо придерживаться при выращивании культур клеток:
1) правила асептики;
2) использование специальной пласти-ковой или из нейтрального стекла посуды и высокоочищенных реактивов;
3) выращивание клеток в специальных питательных средах с внесенными антибиотиками в термостате при 36-38 °С с регулируемой подачей СО2.
Слайд 23Типы культур клеток
В зависимости от технологии приготовления культу-ры клеток
условно делят на: первично-трипсинизированные; перевиваемые или
стабильные; диплоидные; органные культуры.
Первично-трипсинизированные культуры
из клеток эмбрионов человека, почек мартышек, фибробластов эмбриона курицы и тому подобное. Их получают путем ферментативной дезинтеграции тканей и органов (трипсином). Эти культуры способны расти на протяжении нескольких (1-3, редко до 10) пассажей в условиях in vitro (период генерации 3-7 суток), высокочувствительны, неопухолевые (безопасны), в суспензии не размножаются.
Слайд 24 Перевиваемые культуры клеток –
они представляют собой один тип
клеток, которые приобрели способность к неограниченному росту и размножению in
vitro. Их получают из опухолей или из нормальных человеческих или животных тканей, которые имеют измененный кариотип, что и обеспечивает непрерывность их роста. HeLa - карцинома шейки матки, Hep-2 - карцинома гортани человека, КВ - карцинома ротовой полости человека, RD - рабдомиосаркома человека, RH -почка эмбриона человека, Vero - почка зеленой мартышки, СПЭВ - почка эмбриона свиньи, ВНК-32 - почка сирийского хомяка. Период генерации этих клеток 1 сутки (или меньше).
Слайд 25 Диплоидные культуры клеток - они
представляют собой культуры клетки
одного типа, имеют диплоидный набор хромосом и способные выдерживать при
этом до 100 пассажей (чаще 20-50) в условиях лаборатории. Они являются удобной моделью для получения вакцинных препаратов вирусов, так как свободные
от контаминации инородными
вирусами, хранят исходный
кариотип во время пассажей, не
имеют онкогенной активности.
Чаще всего пользуются линиями
культур, которые получены с фибро-
бластов эмбриона человека (WI-38, MRC-5, MRC-9, IMR-90), коров, свиней, овец и тому подобное.
Слайд 26 Органные культуры – это кусочки органов,
которые сохраняют морфологические
признаки этих
органов вне организма при культивировании in vitro.
Методика выращивания
органных культур более сложная, их выращивают на поверхности сгустков плазмы, плотной агаровой среды, на специальных жестких каркасах в жидких средах, на милипоровых
фильтрах – методами
«платформы» или
«плота».
Слайд 27Питательные среды для культур клеток
Среды для культур клеток, применяемые в
вирусологии, делят по назначению на 2 основных категории: среды роста
и среды поддержки.
Ростовые среды (РС), благодаря высокому
содержанию сыворотки, способствуют быстрому клеточному росту. После формирования монослоя и перед инокуляцией вируса ростовую среду удаляют и заменяют средой поддержки. Для приготовления ростовой среды к питательной основе (например, ДМЕМ), добавляют 5-10% сыворотки крупного рогатого скота (ВРХ) или эмбриональной телячьей сыворотки (ЕТС) и антибиотики (пенициллин и стрептомицин).
Слайд 28 Среды поддержки (СП) – имеют низкое
содержание сыворотки, что
позволяет сохранить культуры клеток в состоянии медленного стойкого метаболизма в
период размножения вируса.
По способу получения (изготовления) среды делятся на: естественные, ферментативные, искусственные.
Естественные среды - сыворотка крови
крупного рогатого скота, жидкости из серозных полостей, вытяжки из эмбрионов. Например, среда Эндерса: 85-90 % амниотической жидкости коровы, 5-10 % коровьего эмбрионного экстракта, 5 % конской сыворотки.
Слайд 29 Ферментативные среды - продукты
многообразных гидролизатов: молока, крови, белксодержащих
субстратов, (5 % гемогидролизат, 0,5 % гидролизат лактоальбумина, 10 %
аминопеп-тид).
Химический состав естественных и ферментативных питательных сред помогает создать условия подобные к тем, которые существуют в организме человека. Существенным недостатком таких сред считается их нестандартность, ведь качественный и количественный состав компонентов, которые входят в их рецептуру, может изменяться.
Слайд 30 Синтетические питательные среды –
имеют стандартный химический состав, потому
что их получают комбинируя многообразные солевые растворы, витамины, аминокислоты и
другие ингредиенты в искусственных условиях. К таким наиболее употребляемым средам принадлежат среда 199 (для культивирования первично-трипсинизированных и перевиваемых культур клеток), среда Игла (содержит минимальный набор аминокислот и витаминов и используется для культивирования диплоидных линий клеток и перевиваемых), среда МЕМ (Мельника-Игла, для культивирование особенно требовательных линий клеток), раствор Хенкса (для изготовления питательных сред, отмывания клеток).
Слайд 31Выращивают культуры клеток
путем их диспергирования и помещения на плоскую
повер-хность в питательную среду с антибиотиками. Растут культуры клеток в
виде монослоя.
Лабораторная диагностика вирусных инфекций с исполь-зованием метода культуры клеток осуществляется в два этапа. На первом этапе проводят заражение культуры клеток исследуемым клиническим материалом и выделяют вирус, а на втором - идентифицируют вирус.
Слайд 32Признаки наличия вирусов в культуре клеток
Цитопатическое действие вируса;
Формирование
внутриклеточных
специфических включений;
Бляшкообразование;
Реакция гемагглютинации;
Реакция гемадсорбции;
Цветная проба;
Выявление вируса современными
иммунологическими (РИФ, РНИФ, ИФА и др.) и молекулярно-генетическими методами (гибридизацией нуклеиновых кислот, ПЦР).
Слайд 33ЦПД - видимые под микроскопом
морфологические изменения клеток,
возникающие в результате
внутрик-
леточной репродукции вирусов.
ЦПД разделяют на 2 группы:
с полной и
частичной дегенерацией культур клеток. При полной мелкоклеточной деге-
нерации (например, под действием
пикорнавирусов полиомиелита,
Коксаки, ЕСНО) отмечается полное
сморщивание клеток, пикноз и
массовое слущивание клеток со стенок
емкости для культивирования.
ЦИТОПАТИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ (ЦПД)
ВИРУСОВ
Слайд 34При частичной дегенерации различают три основных типа ЦПД:
Симпластообразование –
слияние
клеток между собой и образование
многоядерных гигантских клеток (вы-
зывают
вирусы кори, паротита, герпеса)
Гроздьеобразование - округлива-
ние клеток с частичным их слиянием
(вызывают аденовирусы).
Очаговый тип деструкции -
наличие в монослое клеток очагов пораженных и слущенных клеток (вызывает вирус оспы и гриппа). Для онкогенных вирусов возможен пролиферативный тип ЦПД с чрезмерным разрастание клеток монослоя и образование многослойных конгломератов.
Слайд 36Внутриклеточные специфические включения
Внутриклеточные включения - скопления вирионов или отдельных их
компонентов в цитоплазме или ядре клеток, выявляемые под микроскопом с
использованием специальных методов окраски. Включения в цитоплазме образуют РНК-содержащие вирусы, а скопления в ядре ДНК-вирусы. Вирус нату-ральной оспы образует цитоплаз-матические включения - тельца Гварниери, а вирус бешенства – Бабеша-Негри. Вирусы герпеса и аденовирусы образуют внутриядерные включения.
Тельца Бабеша-Негри
Слайд 37Бляшкообразование вирусами
Бляшки – ограниченные участки (очаги) разрушенных вирусами монослоя
клеток, культивируемых на питательной среде под агаровым или бентонитовым покрытием,
которые выглядят как светлые пятна на фоне окрашенных живых клеток (например, на розово-красном монослое при окраске нейтральным красным). Одна бляшка – это клетки, разрушенные потомством одного вируса (метод Дульбеко, 1952 г.) .
Слайд 38Реакция гемадсорбции(РГадс)
Гемадсорбцией называется адсорбция (прилипание) эритро-цитов к поверхности клеток, зараженных вирусом.
Чаще это явление наблюдают у гемагглютинирующих вирусов (в РГА). Так,
гемадсорбирующими
свойствами обладают вирусы
гриппа, вирус натуральной оспы,
простого герпеса 3-го типа и др.
Наблюдаются различия в
типе адсорбции (диффузный,
очаговый), виде сорбируемых
эритроцитов (человека, обезьян,
морской свинки и др.), темпера-
туре, при крой протекает реакция
(37°С , 0°С) др.
Слайд 39Цветная проба (ЦП)
ЦП предусматривает, что при взаимодействии вирусов с
культурой клеток последние погибают, рН среды остается щелочным, и цвет
индикатора не изменяется. При отсутствии вирусов (или при нейтрализации вирусов антителами специфической сыворотки) создаются условия для развития культур клеток. Они остаются живыми, активно осуществляют обмен веществ,
в результате чего образуются
продукты клеточного метаболизма,
которые сдвигают рН среды в кислую
сторону. Это приводит к изменению
цвета индикатора фенолрота из
розового (щелочное рН) на соломенно
-желтый или оранжевый (кислое
значение рН).
Слайд 40Идентификация изолированных вирусов
Для идентификации (определение вида, типа) выделенных вирусов применяется
широкий спектр методов. Однако, традиционно наиболее широко используются для этой
цели серологические (иммунологические) реакции, в основе которых лежит взаимодействие вирусов и специфических по отношению к ним антител.
Наиболее часто для серологической идентификации вирусов применяют: реакцию торможения гемагглютинации, реакцию нейтрализации, реакцию торможения гемадсорбции и ряд современных методов.
Слайд 41Реакция торможения гемагглютинации
РТГА основана на способности вирусов вызывать агглютинацию
эритроцитов. сущность - феномен предотвращения (торможения) иммунной сывороткой гемагглютинации эритроцитов
вирусами.
Слайд 42РТГА базируется на способности блокировать гемагглютинирую-щие свойства вирусов с помощью
специфических противовирусных сывороток (антител). В результате этого наблюдается задержка агглютинации
эритроцитов.
Слайд 43Реакция нейтрализации (РН)
Принцип РН основывается на взаимодействии специфических антител иммунной
сыворотки с вирусом (при их смешивании), которое приводит к нейтрализации
вируса. РН можно ставить в культурах клеток с учетом результатов по цитопати-ческому действии, в цветной пробе, с помощью рН-метрии и феноменом бляшкообразования. Кроме того можно использовать для постановки реакции другие живые системы - куриные эмбрионы и лабораторные животные. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели эмбриона и клеток в их культурах.
Слайд 44
Схема реакции нейтрализации вирусов
Слайд 45Реакция торможения гемадсорбции РТГадс)
Принцип РТГадс базируется на явлении гемадсорбции. Оно
заключается в том, что эритроциты приобретают способность адсорбироваться на поверхности
культур клеток, которые испытали модификацию в результате появления в оболочке антигенов (гликопротеинов) вирусов. Антитела иммунной сыворотки при взаимодействии с поверхностными антигенами вирусов, представленными в оболочке, связывают их, вследствие чего тормозится адсорбция эритроцитов на клетках.
Слайд 46Современные методы идентификации вирусов
Реакцию связывания комплемента (РСК) достаточно
широко используют
в вирусологической практике для идентификации болезнетворных агентов. Она принадлежит к
непрямым двухсистемным гетерологическим реакциям и основывается на принципе взаимодействия комплемента со специфическим комплексом антиген+антитело. В результате этого не происходит гемолиз сенсибилизирован-ных эритроцитов.
Метод иммунной электронной микроскопии
(ИЕМ) позволяет определить комплексы, которые образуются в результате взаимодействия вирусных антигенов со специфическими антителами сывороток. Во многих случаях этот метод является эффективнее, чем испо-льзование обычной электронной микроскопии, так как агре-гации вирусов, нагруженных антителами, выявляются легче.
Слайд 47 Метод иммунофлюоресценции –
основанный на использовании специфичности иммунологической реакции (антиген+антитело)
и чувствительности флюоресцентной микроскопии. Он может быть как прямым, так
и непрямым. Принцип метода заключается во взаимодействии антигенов с антителами, мечеными флуорохромами (дающих определенного цвета свечение в ультрафиолетовых лучах). Метод непрямой иммунофлюоресценции можно эффективно использовать для идентификации большинства вирусов. системы.
Слайд 48
Метод имуноферментного анализа (ИФА) заключается в том, что на
твердой фазе (например, в лунках пластиковых планшет) сорбируют известные противовирусные
моноклональные антитела (АТ), потом добавляют суспензию с идентифицируемыми вирусами (антиген, АГ), после инкубирования несвязанный АГ декантируют, систему промывают и вносят меченые AT, специфичные к сорбированным AГ. Повторяют процедуру инкубирования и отмывания, вносят хромогенный субстрат, положительный результат фиксируют при изменении окраски.
Слайд 49 Метод гибридизации нуклеиновых кислот
(использование ДНК и РНК зондов)
- высокос-пецифичный метод, позволяющий идентифицировать геном вируса после его гибридизации
комплементарными молекулами ДНК. В качестве маркёра применяют ферменты, изотопы, флюорогромы. Метод определяет способность вирусной ДНК гибридизироваться с меченой комплементарной ДНК. Метод используют для выявления вирусов простого герпеса, папилломы человека, Эпштейна-Барр и др.
Метод полимеразной цепной реакции
(ПЦР) - состоит в многократном синтезе (амплификации) копий генетического материала вирусов в лабораторных условиях и на идентификации возбудителя по его ДНК или РНК.
Слайд 50Методы определения количества вирусных частиц
Количество - концентрацию
вирусных частиц в единице объема определяют с помо-щью электронной микроскопии
и методами титрации. В первом случае выявляют все вирионы,а во втором – только инфекционные (количество инфекционныъ единиц, содержащихся в 1 мл вирусной суспензии). Все методы титрования виру-сов основаны на заражении 10-кратными разведе-ниями материала чувствительных животных, куриных эмбрионов, культур клеток. За титр вируса принимают наибольшее разведение, вызывающее локальное или общее поражение тест-системы. Титр вируса выражают в виде десятичного логарифма.
Слайд 51 Наиболее часто используемыми методами титрования вирусов являются:
титрование вирус
по
геммагглютинирующей активности;
титрование вирусов по ЦПД;
титрование вирусов
методом бляшек;
Возможно определять количество вирусных частиц и современными методами (ДНК- или РНК-зонд гибридизации; ПЦР в реальном времени и др.)
Слайд 52Определение титра вируса в реакции гемагглютинации
Реакция гемагглютинации (РГА)
позволяет
быстро определить гемагглютинационный титр вирусов имеющих гемагглютинины. Принцип метода основан
на склеивании взвешенных в жидкости эритроцитов под воздействием гемагглютинирующих свойств серии 10-кратных разведений вируса и образования рыхлого осадка в виде зонтика. За одну гемагглютинирующую единицу (1 АЕ) принимают
наибольшее разведение виру-
са, которое обуславливает
четко выраженную гемагглю-
тинации не менее чем на 50 %.
Слайд 53Определение титра вируса по ЦПД
При определении титра вируса
по его ЦПД
культуры клеток заражают десятикратным разведением вируса. После
6—7-дневной инкубации их просматривают на
наличие ЦПД. За титр
вируса принимают
наибольшее разведе-
ние, которое вызьвает
ЦПД в 50% заражен-
ных культур
( ЕД50 ЦПД).
Слайд 54Определение титра вирусов методом бляшек
Метод бляшек (Дульбекко, 1952) в настоящее
время
наиболее широко распространен для определения количества вирусов. Суспензию, содержащую
вирус,
помещают на клеточный монослой и остав-
ляют примерно на час, с тем чтобы вири-
оны прикрепились к клеткам; затем жид-
кость замещают плотным гелем, который
ограничивает распространение дочерних
вирусных частиц, так что ими могут быть
заражены только клетки, соседние с
первоначально инфицированными. Таким
образом, каждая инфекционная частица
дает локальное скопление зараженных
клеток, которое через несколько дней становится настолько большим, что его можно видеть невооруженным глазом.
