Слайд 1Раздражимость и возбудимость клеток и тканей.
Методы исследования электровозбудимых мембран.
Потенциал покоя
и механизм его формирования
Слайд 2РАЗДРАЖИМОСТЬ – ОБЩЕЕ СВОЙСТВО ВСЕХ ЖИВЫХ ОРГАНИЗМОВ
Слайд 4Мера возбудимости – порог раздражения, т.е. минимальная сила раздражителя, вызывающая
ответ.
ВОЗБУЖДЕНИЕ – сложный биологический процесс, который характеризуется специфическим изменением обмена
веществ, временной деполяризацией мембраны клеток и проявляющейся специализированной реакцией ткани.
Слайд 5РАЗДРАЖИТЕЛИ
ПОДПОРОГОВЫЕ
СВЕРХПОРОГОВЫЕ
ПОРОГОВЫЕ
Слайд 6РАЗДРАЖИТЕЛИ
ФИЗИЧЕСКИЕ (механические, звуковые, световые, температурные, электрические)
ХИМИЧЕСКИЕ (щелочи, кислоты, гормоны, продукты
обмена веществ)
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ (изменения осмотического давления, рН и т.п.)
Слайд 7РАЗДРАЖИТЕЛИ
НЕАДЕКВАТНЫЕ
АДЕКВАТНЫЕ
Слайд 8СООТНОШЕНИЕ МЕЖДУ ПОРОГОВОЙ СИЛОЙ РАЗДРАЖЕНИЯ И ЕГО ДЛИТЕЛЬНОСТЬЮ
Слайд 9КРИВАЯ «СИЛА – ДЛИТЕЛЬНОСТЬ»
OA – реобаза
ОС – полезное время
OD – 2 реобазы
OF – хронаксия
Слайд 11МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЭЛЕКТРОВОЗБУДИМЫХ ТКАНЕЙ
Слайд 12ПРОГРЕСС В ИССЛЕДОВАНИИ БИОПОТЕНЦИАЛОВ ОБЕСПЕЧЕН
РАЗРАБОТКОЙ МИКРОЭЛЕКТРОДНОГО МЕТОДА ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ОТВЕДЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛОВ
СОЗДАНИЕМ
СПЕЦИАЛЬНЫХ УСИЛИТЕЛЕЙ БИОПОТЕНЦИАЛОВ
ВЫБОРОМ УДАЧНЫХ ОБЪЕКТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Слайд 13ДИАМЕТР гигантского аксона – 0,5 – 1 мм
Слайд 14Гигантский аксон кальмара в чашке Петри.
Слайд 15ОСНОВНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ УСТАНОВКИ ДЛЯ ИЗУЧЕНИЯ ВОЗБУДИМЫХ КЛЕТОК И ТКАНЕЙ
1) электроды
для регистрации и стимуляции;
2) усилители биоэлектрических сигналов;
3) регистратор;
4) стимулятор;
5) система для обработки физиологической информации.
Слайд 16a - внутриклеточное раздражение и отведение потенциалов гигантского аксона кальмара
при коаксиальном введении электродов .
б - раздражение и отведение
потенциалов от одиночного перехвата Ранвье, изолированного двумя воздушными промежутками ("мостиками").
Схемы методик, применяемых для различных нервных волокон, с целью исследования их электрогенеза
Слайд 17НЕПОЛЯРИЗУЮЩИЕСЯ ЭЛЕКТРОДЫ: хлорсеребряный электрод
ХЛОРСЕРЕБРЯНЫЙ ЭЛЕКТРОД: серебряная пластинка (проволока), покрытая слоем
малорастворимой соли серебра и опущенная в насыщенный раствор хлорида калия.
Часто
используется, т.к. имеет стабильный потенциал, а также простую конструкцию.
Слайд 18Микроэлектроды введены в практику в1946 американскими учёными Р. Джерардом и
Дж. Лингом.
Применяются для отведения электрических потенциалов от одиночного мышечного
волокна или от отдельной клетки.
Слайд 19Микроэлектрод - тонкий стеклянный капилляр, кончик которого имеет диаметр около
1 мкм, заполненный солевым раствором с погруженным в него металлическим
электродом.
.
Стеклянные микроэлектроды:
А - одноканальный;
Б - двухканальный;
справа- кончик микроэлектрода около тела нейрона
Слайд 21Как только микроэлектрод прокалывает мембрану, луч осциллографа отклоняется вниз из
своего исходного положения и устанавливается на новом уровне. Это свидетельствует
о наличии разности потенциалов между наружной и внутренней поверхностью клеточной мембраны.
Слайд 22Внутриклеточная регистрация трансмембранных потенциалов и электростимуляция клеточной мембраны
А — схема
установки для изучения электрических характеристик клеточных мембран; Б — момент
введения микроэлектрода а клетку. 1 — стеклянный микроэлектрод для подачи тока; 2 — стеклянный микроэлектрод для регистрации реакции клеточной мембраны; 3 — электроды сравнения; 4 — измеритель величины раздражающего тока; 5 — усилитель; 6 — регистратор.
Слайд 23
В лабораторных исследованиях используются
металлические микроэлектроды с диаметром кончика порядка
1 мкм;
стеклянные микропипетки с диаметром кончика меньше 1 мкм,
заполненные раствором электролита.
Слайд 25Метод пэтч-кламп (метод локальной фиксации потенциала) введен в лабораторную практику Э. Неером и
Б. Сакманом в 1976 г.
Слайд 26Клеточная мембрана формирует очень плотный контакт с поверхностью кончика микроэлектрода.
Между стеклом и мембранным фрагментом возникает контакт, имеющий гигаомное сопротивление.
В результате образуется электрически изолированный участок мембраны, и шум регистрирующего сигнала уменьшается на несколько порядков. К участку прикладывается напряжение и меряется возникший ионный ток.
Слайд 28ИЗМЕРЕНИЯ НА ПРИКРЕПЛЕННОЙ, НО НЕПОВРЕЖДЕННОЙ КЛЕТКЕ
ИЗМЕРЕНИЯ НА ЦЕЛОЙ КЛЕТКЕ ПРИ
РАЗРУШЕНИИ МЕМБРАНЫ В КОНЧИКЕ МИКРОПИПЕТКИ
Слайд 31Мембранная теория возбуждения:
при раздражении возбудимой клетки в её поверхностной
мембране происходит молекулярная перестройка, которая приводит к изменению проницаемости мембраны
и появлению трансмембранных ионных токов.
Слайд 32Основные положения мембранной теории возбуждения сформулированы немецким нейрофизиологом Ю. Бернштейном
(1902)
ПОЛЯРИЗАЦИЯ КЛЕТОЧНОЙ МЕМБРАНЫ В ПОКОЕ
Слайд 33Развитие мембранной теории возбуждения получило в трудах английских учёных: П.
Бойла и Э. Конуэя (1941), А. Ходжкина, Б. Каца, А.
Хаксли (1949).
А. ХОДЖКИН
А. Хаксли
Нобелевская премия по физиологии и медицине, 1963 г
"За открытия, касающиеся ионных механизмов возбуждения и торможения в периферических и центральных участках мембраны нервных клеток"
Слайд 34Регистрация мембранного потенциала покоя
А — микроэлектрод 1 еще не введен
в нервное волокно; прибор показывает, что разность потенциалов у микроэлектрода
и индифферентного электрода 2 равна нулю.
Б — микроэлектрод введен в нервное волокно (прокол мембраны); он регистрирует постоянный отрицательный потенциал относительно внешнего раствора — мембранный потенциал покоя.
Слайд 35Потенциал покоя, механизм его формирования
Слайд 36Предположение Бернштейна:
поверхностная мембрана возбудимой клетки в покое обладает избирательной проницаемостью:
ионы K+ проходят через неё гораздо легче, чем ионы Na+
и Cl-.
Т. к. концентрация K+ в клетке выше, чем во внеклеточной среде, диффузия этих ионов через мембрану создаёт на ней разность потенциалов —потенциал покоя (ПП), причём внутренняя сторона мембраны оказывается заряженной отрицательно, а внешняя — положительно.
Слайд 37ДИФФУЗИОННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ
Na+
Na+
Na+
Na+
Cl-
Cl-
Cl-
+
-
ПОДВИЖНОСТЬ ИОНОВ ХЛОРА (v) ВЫШЕ, ЧЕМ ИОНОВ НАТРИЯ (u)
Слайд 38МЕМБРАННЫЙ ПОТЕНЦИАЛ
Cl-
Cl-
К+
К+
МЕМБРАНА НЕ ПРОНИЦАЕМА ДЛЯ ИОНОВ ХЛОРА
-
+
Слайд 39ЭЛЕКТРОХИМИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ
УСЛОВИЕ РАВНОВЕСИЯ
РАВНОВЕСНЫЕ ПОТЕНЦИАЛЫ:
ENa=+35…+65 мВ
EK = -70…-100 мВ
Слайд 40Возникновение электрохимического равновесия на полупроницаемой мембране.
Диффузионное давление (1) в
равновесии с противоположной электростатической силой (2), стремящейся удержать вместе ионы
с противоположными зарядами
Слайд 41состояние равновесия наступает в результате диффузии лишь очень небольшого количества
ионов (по сравнению с их общим содержанием);
калиевый равновесный потенциал всегда
больше (по абсолютному значению) реального потенциала покоя
Слайд 43Зависимость мембранного потенциала (МП) нервного волокна каракатицы от наружной концентрации
К+(1) и величина МП, рассчитанная по уравнению Нернста для калиевого
электрода (2)
Слайд 44Зависимость величины ПП от [K+]е (расчетная и экспериментальная кривые).
По
оси абсцисс – содержание калия во внешней среде в мМ,
по оси ординат – величина мембранного потенциала в мВ.
Слайд 47А - структуры мембраны, формирующие потенциал покоя
Б - измерительная
схема.
В - потенциал покоя
Слайд 48А: мембрана клетки, канал утечки, Nа+-канал, К+-канал и -АТФаза, которая
выкачивает ионы Na+ из клетки против его электрохимического градиента, одновременно вводя
ионы K+ в клетку также против его электрохимического градиента.
Каналы утечки, через которые осуществляется очень незначительный вход ионов Na+ в клетку и превышающий его в 100 раз выход ионов К+ из клетки.
За счет каналов утечки и работы Na+/K+-АТФазы возникает негативный внутриклеточный потенциал мембраны клетки - потенциала покоя.
Слайд 49УРАВНЕНИЕ НЕРНСТА
Здесь и далее индекс «е» относится к внешним концентрациям
ионов, а индекс «i» - ко внутренним.
Слайд 51ПП гигантского аксона кальмара ( - 70 мВ) близок к
его Ек ( - 75 мВ), но не равен ему.
ПРИЧИНА:ПП
формирует утечка и других ионов: Na+, Cl-.
При этом поступление Сl- в аксон, (Еcl> - 70 мВ) повышает, a Na+ понижает ПП (ENa=+55MB).
Слайд 52Итоговая величина ПП, обусловленного переносом многих ионов может быть достаточно
точно рассчитана по формуле Гольдмана.
Слайд 53УРАВНЕНИЕ ГОЛЬДМАНА
PK : PNa: PCl = 1 : 0,04 :
0,45
Соотношение проницаемостей потенциалообразующих ионов в состоянии покоя
Слайд 54Вклад активного транспорта в формирование потенциала покоя
Слайд 56РОЛЬ Na/K НАСОСА В ГЕНЕРАЦИИ ПП
Поддержание высокой концентрации К+ внутри
клетки, что обеспечивает постоянство величины ПП. Электрогенность насоса: вклад в
ПП.
Поддержание низкой концентрации Na+ внутри клетки, что, с одной стороны, обеспечивает генерацию потенциала действия, с другой — обеспечивает сохранение нормальных осмолярности и объема клетки.