Слайд 1Серологический метод исследования.
Акинина Н. И.
Слайд 2Серологический метод исследования.
Реакции антиген—антитело
Особенности взаимодействия антитела с антигеном являются
основой диагностических реакций в лабораториях.
Слайд 3Реакция in vitro между антигеном и антителом состоит из:
специфической.
В специфическую
фазу происходит быстрое специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой
антигена.
неспецифической фазы.
Затем наступает неспецифическая фаза — более медленная, которая проявляется видимыми физическими явлениями, например образованием хлопьев (феномен агглютинации) или преципитата в виде помутнения. Эта фаза требует наличия определенных условий (электролитов, оптимального рН среды).
Слайд 5серологическая идентификация
При выделении микроба от больного проводят идентификацию возбудителя путем
изучения его антигенных свойств с помощью иммунных диагностических сывороток, т.
е. сывороток крови гипериммунизированных животных, содержащих специфические антитела. Это так называемая серологическая идентификация микроорганизмов.
Слайд 6Материал для исследования
Сыворотка крови
Слюна
Фекальные массы
Слайд 7Реакция агглютинации — РА
простая по постановке реакция, при которой
происходит связывание антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток,
нерастворимых частиц с адсорбированными на них антигенами, а также макромолекулярных агрегатов). Она протекает при наличии электролитов, например при добавлении изотонического раствора натрия хлорида.
Применяются различные варианты реакции агглютинации:
развернутая,
ориентировочная,
непрямая и др.
Реакция агглютинации проявляется образованием хлопьев или осадка (клетки, «склеенные» антителами, имеющими два или более антигенсвязывающих центра).
Слайд 9РА используют для:
определения антител в сыворотке крови больных, например, при
бруцеллезе (реакции Райта,Хеддельсона), брюшном тифе и паратифах (реакция Видаля) и
других инфекционных болезнях;
определения возбудителя, выделенного от больного;
определения групп крови с использованием моноклональных антител против алло-антигенов эритроцитов.
Слайд 10РРА
Для определения у больного антител ставят развернутую реакцию агглютинации: к
разведениям сыворотки крови больного добавляют диагностикум (взвесь убитых микробов,) и
через несколько часов инкубации при 37 °С отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация, т. е. образовался осадок.
Слайд 11ОРА
Если необходимо определить возбудитель, выделенный от больного, ставят ориентировочную реакцию
агглютинации, применяя диагностические антитела (агглютинирующую сыворотку), т. е. проводят серотипирование
возбудителя. Ориентировочную реакцию проводят на предметном стекле.
Слайд 13Реакции преципитации
это осаждение растворимого антигена при действии антител в присутствии
электролита. Видимый эффект реакции (феномен преципитации) – помутнение (образование мутного
кольца или осадка – преципитата).
Слайд 16Реакция связывания комплемента
используют для выявления антител на определенный антиген
или определяют тип антигена по известному антителу.
Это сложная серологическая реакция,
в ней участвуют две системы и комплемент:
Первая система – бактериологическая (основная), состоит из антигена и антитела (один известный, другой нет).
Вторая система – гемолитическая (индикаторная). В нее входят эритроциты барана (антиген) и соответствующая им гемолитическая сыворотка (антитело).
Слайд 17Реакция связывания комплемента
Ставят в два приема:
вначале соединяют антиген с
испытуемой сывороткой крови, в которой отыскивают антитело
затем добавляют комплемент.
Слайд 18рск
Если антиген и антитело соответствуют друг другу, то образуется иммунный
комплекс, который связывает комплемент.
При отсутствии в сыворотке антител иммунный комплекс
не образуется и комплемент остается свободным.
Поскольку процесс адсорбции комплемента комплексом визуально невидимый, то для выявления этого процесса добавляют гемсистему.
Слайд 19УЧЕТ РСК
Если в первой (баксистеме) комплемент связался, то при добавлении
гемсистемы гемолиз эритроцитов не произойдет – реакция положительная.
Если же
комплемент не связался в первой системе из-за отсутствия антител, то он свяжется с гемсистемой, в результате чего произойдет гемолиз эритроцитов – реакция отрицательная.