Слайд 1Средства специфической профилактики, терапии и диагностики инфекционных болезней
Слайд 3Вакцина представляет собой биологический препарат, приготовленный из возбудителей инфекции, лишенных
патогенных свойств, но сохранивших иммунногенные свойства. Введение в организм вакцины
ведет к активации факторов иммунитета, в том числе и к образованию антител против того возбудителя, из которого приготовлена вакцина.
Вакцина – это биопрепарат, предназначенный для создания искусственного активного иммунитета.
Слайд 4 Различают:
инактивирован-ные вакцины,
живые вакцины,
генно-инженерные вакцины.
Слайд 5Инактивированные вакцины
В состав практически всех инактивированных вакцин входят адьюванты.
Адьюванты (от
англ. adjivant – помогающий) – вещества антигенной и неантигенной природы,
различные по химическому составу, которые при совместном с антигеном введении в организм вызывают неспецифическое стимулирование иммуногенеза. Наиболее используемые: минеральный гель, алюмокалиевые квасцы, безводный ланолин.
Слайд 7Вакцины инактивированные корпускулярные
Содержат цельные инактивированные микробные клетки.
Получение:
1. В зависимости
от антигенной гетерогенности конкретного возбудителя в состав вакцины включают штаммы
одного или нескольких сероваров. Используют штаммы бактерий без признаков диссоциации. Бактериальную массу чаще получают путем выращивания вакцинных штаммов в жидких питательных средах в ферментерах.
Слайд 8
2. Бактериальные клетки инактивируют физическими или химическими методами.
3. Устанавливают необходимую
концентрацию микробных клеток в 1 мл суспензии.
4. Добавляют адьювант.
5. Препарат
расфасовывают и контролируют.
Слайд 9
Физические методы инактивации:
Прогревание при 55-60°C
Ультразвук
Ультрафиолетовое облучение
Ионизирующее излучение
Химические методы инактивации:
Формалин
Глутаровый
альдегид
Бета-пропиолактон
Кристаллвиолет
Метиленовый синий и тд.
Слайд 10
К любому методу инактивации микроорганизмов предъявляют два основных требования:
1) полная
инактивация клеток возбудителя;
2) отсутствие существенных нарушений в антигенных и иммуногенных
свойствах возбудителя.
Слайд 11Химические вакцины
В качестве иммуногенного начала содержат извлеченные тем или иным
способом из микробной клетки различные химические соединения.
К преимуществу химических вакцин
относят возможность отделить иммуногенный компонент от балластных веществ клетки, что позволяет снизить реактогенность препарата.
В принципе к химически вакцинам можно отнести и анатоксинвакцины.
Слайд 12Анатоксивакцины
Содержат в качестве иммуногенного начала инактивированный формалином экзотоксин бактерий –
анатоксин.
Получение:
1.Токсинообразующий штамм возбудителя культивируют в жидкой питательной среде в условиях,
обеспечивающих максимальное накопление токсина в культуральной жидкости.
2.Культуральную жидкость отделяют от бактериальной массы.
3. Экзотоксин переводят в состояние анатоксина воздействием формалина в тепле.
Слайд 13Анавакцины
При производстве анавакцин микробную массу и токсин не разделяют, готовый
препарат содержит инактивированные микробные клети и анатоксин.
Слайд 14Живые вакцины
– искусственно ослабленные или природные авирулентные (слабовирулентные)
штаммы возбудителя, которые утратили способность вызывать у естественно-восприимчивых животных болезнь,
но могут в течение определенного промежутка времени размножаться в организме вакцинированного животного, вызывая иммунный ответ.
Слайд 16Основные требования к вакцинным штаммам.
Отсутствие склонности к реверсии (возвращению в
исходное вирулетное состояние).
Неконтагиозность (возбудитель вакцинного штамма не должен передаваться от
вакцинированного животного к невакцинированному).
Желательно, чтобы вакцинный штамм нес стабильный маркер, отличающий его от эпизоотических штаммов возбудителя.
Слайд 17Генно-инженерные вакцины
Получают путем введения в геном какого-либо безвредного микроорганизма определенного
гена или группы генов возбудителя болезни. Например, генов, контролирующих синтез
протективного антигена, что обеспечивает иммуногенность рекомбинантного штамма.
В качестве передатчика генов (вектора) обычно используют плазмиды или фаги.
Слайд 19Проводят по трем основным параметрам.
1. Стерильность (инактивированные) или чистота роста
(живые). Контролируют посевом на питательные среды.
2. Безвредность. Проверяют введением вакцины
тем или иным лабораторным животным. Вакцина не должна вызывать заболевание и гибель животных.
Слайд 203. Специфическая активность (иммуногенность). Контролируют следующим образом: вакцину вводят группе
лабораторных животных и через промежуток времени, достаточный для выработки активного
иммунитета (15-20 суток), животных этой группы вместе с контрольными непривитыми заражают заведомо летальной дозой возбудителя. Контрольные животные должны погибнуть, 80% и более вакцинированных должны выжить. В некоторых случаях об иммуногенности препарата судят по косвенным показателям: количеству агглютининов у привитых животных (лептоспирозная вакцина), антитоксинов в РН (вакцина против ботулизма).
Слайд 21Лечебно-профилактические иммунные сыворотки и иммуноглобулины
Слайд 23Данные биопрепараты применяют для создания искусственного пассивного иммунитета. Пассивный иммунитет
возникает через 20-24 ч после инъекции препарата и длится максимум
2-3 недели.
Иммунные сыворотки получают путем многократного введения антигена животным-продуцентам (волам, лошадям и т.д). При достижении необходимого уровня антител у животного берут кровь, сепарируют ее для получения сыворотки, которую стерилизуют фильтрованием и консервируют 0,25...0,5% фенола, 0,01-0,3% тиомерсала или другими веществами.
Слайд 24 По направленности действия иммунные сыворотки подразделяют на:
антибактериальные,
антитоксические,
антивирусные.
Слайд 25Контроль сывороточных препаратов.
Проводят по трем основным параметрам.
Стерильность препаратов проверяют посевом
на питательные среды (МПА, МПБ, МППБ, агар Сабуро или Чапека).
2.
Безвредность каждой серии контролируют введением сыворотки лабораторным животным.
Слайд 263. Определение превентивных (защитных) свойств сыворотки на естественно-восприимчивых или лабораторных
животных заключается в том, что животным вводят сыворотку (п/к, в/м
или в/б), а через 20-24ч иммунизированных и контрольных животных заражают летальной дозой гомологичного вирулентного микроорганизма. Иммунизированные животные должны остаться здоровыми при гибели или характерном переболевании контрольных.
Слайд 27Активность антитоксических и ряда противовирусных сывороток определяют в реакциях нейтрализаци.
Количество антител в сыворотках устанавливают при помощи различных серологических реакций
(РСК, РА, РНГА, РДП и т.д.)
Слайд 28Диагностические иммунные сыворотки и глобулины
Слайд 29Принцип получения диагностических иммунных сывороток такой же, как и лечебно-профилактических,
но диагностические сыворотки должны характеризоваться не только активностью в серологических
реакциях, но и высокой специфичностью.
С помощью диагностических сывороток обнаруживают микробные антигены в тканевых материалах и идентифицируют выделенные микроорганизмы.
Слайд 30Различают:
видовые сыворотки (предназначенные для идентификации микроорганизмов на уровне вида),
групповые (идентификация
на уровне серологической группы),
серовариантные (на уровне серовара).
Слайд 31Иммунные сыворотки используют в различных серологических реакциях (РА, РП, РСК,
РИГА, РН, ИФА).
При получении антител меченых флуорохромом и ферментами
из иммунных сывороток предварительно выделяют и очищают иммуноглобулиновую фракцию.
Диагностические сыворотки контролируют на стерильность, активность и специфичность.
Слайд 32Моноклональные антитела
Представляют собой иммуноглобулины, продуцируемые одним клоном плазматических клеток и
реагирующие с определенным антигенным эпитопом микроорганизма.
Применяют для того, чтобы избежать
нежелательных перекрестных реакций между сероварами одного вида или между различными видами микроорганизмов за счет общих антигеннах детерминант при использовании иммунных поликлональных диагностических сывороток.
Слайд 33Чтобы получить моноклональные антитела, изолируют и поддерживают линию лимфоцитов, синтезирующих
антитела определенной специфической направленности. Клетки-продуценты антител не способны расти in
vitro. Злокачественная опухоль (миелома) синтезирует в больших количествах аномальные иммуноглобулины и способна к неограниченному росту in vitro.
Разработана методика слияния клеток миеломы с лимфоцитами, при этом гибридная клетка (гибридома), как и опухолевая, способна к неограниченному росту и одновременно синтезирует антитела, как лимфоидная.
Слайд 34Получение моноклональных антител.
Включает в себя несколько этапов.
1. Известным антигеном иммунизируют
животных. Затем из селезенки
выделяют В-лимфоциты.
2. Проводят слияние (гибридизацию) В-лимфоцитов и
миеломных кле
ток. Получают смесь лимфоцитов гибридных и миеломных клеток.
3. Смесь клеток культивируют в среде, содержащей ГАТ (гипоксантин-
аминоптерин-тимидин), что приводит к гибели лимфоцитов и миеломных
клеток, так как на указанной среде могут расти только гибридомы.
Слайд 354. Гибридомные клетки рассевают (клонируют) таким образом, чтобы в лунке
панели для микрокультивирования оказалась только одна клетка, дающая начало клону.
После размножения клеток оценивают их способность синтезировать нужные антитела (проводят скрининг). Клонирование повторяют. В конечном итоге выбирают стабильный клон, продуцирующий антитела заданной специфичности.
Моноклональные антитела выделяют либо из культуральной жидкости (клетки гибридомы выращивают in vitro) либо из асцитической (выращивание гибридомы in vivo).
Слайд 36Моноклональные антитела используют для диагностики инфекционных болезней в иммуноферментном, радиоиммунном
и иммунофлуоресцентном анализах.
Слайд 38Предназначены для серодиагностики инфекционных болезней животных.
Технология приготовления антигенов разнообразна,
но основой для антигенов любого типа служат исходные селекционированные, без
признаков диссоциации штаммы микроорганизмов.
Слайд 39В зависимости от типа серологической реакции антигены могут быть:
корпускулярными (РА,
РСК),
на носителях (эритроцитарные антигенные диагностикумы для РНГА, антигены на
частицах латекса и т.д.),
растворимые (РП, РДП).
Слайд 40Контроль диагностических антигенов.
Проводят по следующим параметрам.
Контроль стерильности. Антиген для серологических
реакций должен находиться в определенной оптимальной концентрации, выраженной, например, количеством
микробных клеток в 1 мл.
Активность антигена определяют в той или иной серологической реакции с заведомо положительной сывороткой.
Слайд 41Специфичность антигена испытывают в серологической реакции с заведомо отрицательной сывороткой.
Корпускулярные антигены для серологических реакций осадочного типа контролируют на спонтанную
агглютинацию – выпадение в осадок в отсутствии антител.
Слайд 43Данные биопрепараты (бруцеллин, туберкулин, маллеин) представляют собой экстракты из клеток
возбудителя.
В основе аллергических диагностических тестов лежит специфическая реакция иммунного
воспаления на месте инъекции (аппликации) аллергена.
Диагностические аллергены контролируют на стерильность, бузвредность и специфичность.
