Разделы презентаций


Титова Татьяна НиколаевнаКафедра лабораторной диагностики ИПО БГМУ Уфа-2013 презентация, доклад

Содержание

Реакции антиген-антитело- основа диагностических реакций.Фазы реакции:специфическая фаза - быстрое специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена. неспецифическая фаза - более медленная, проявляется видимыми физическими явлениями (образование хлопьев, помутнения); требует наличия

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1Титова Татьяна Николаевна Кафедра лабораторной диагностики ИПО БГМУ

Уфа-2013

ИММУНОДИАГНОСТИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ

Титова Татьяна Николаевна Кафедра лабораторной диагностики ИПО БГМУ

Слайд 2Реакции антиген-антитело
- основа диагностических реакций.



Фазы реакции:
специфическая фаза - быстрое специфическое

связывание активного центра антитела с детерминантой антигена.
неспецифическая фаза -

более медленная, проявляется видимыми физическими явлениями (образование хлопьев, помутнения); требует наличия определенных условий (электролитов, оптимального рН среды).

Прочность и количество связавшегося антигена зависят от
свойств антител:
аффинности,
валентности,
авидности.
Реакции антиген-антитело- основа диагностических реакций.Фазы реакции:специфическая фаза - быстрое специфическое связывание активного центра антитела с детерминантой антигена.

Слайд 3Серологические методы
(от лат. serum — сыворотка и logos —

учение)



– методы изучения антител и антигенов с помощью реакций

антиген-антитело, определяемых в сыворотке крови и других жидкостях, а также тканях организма.

ЦЕЛИ:
постановка диагноза (обнаружение в сыворотке больного антител против антигенов возбудителя);
идентификация антигенов микробов, биологически активных веществ, групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, иммунных комплексов, рецепторов клеток и др.(с помощью диагностических сывороток).
Серологические методы (от лат. serum — сыворотка и logos — учение) – методы изучения антител и антигенов

Слайд 4
Виды серологических реакций:


агглютинации,
преципитации,
нейтрализации,
р-ии с участием комплемента,
р-ии

с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический, иммуноферментный, иммунофлюоресцентный методы).

Различаются


по регистрируемому эффекту,
технике постановки.

Характеризуются высокой чувствительностью и специфичностью.

Виды серологических реакций: агглютинации,преципитации, нейтрализации, р-ии с участием комплемента, р-ии с использованием меченых антител и антигенов (радиоиммунологический,

Слайд 5
Реакция агглютинации
(от лат. agglutinatio - склеивание)


реакция связывания антителами

корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток, нерастворимых частиц с

адсорбированными на них антигенами, макромолекулярных агрегатов).

Протекает при наличии электролита (изотонического раствора NaCl)

Проявляется образованием хлопьев или осадка.

Применение:
1) определение антител в сыворотке крови больных (при бруцеллезе - реакции Райта, Хеддельсона, при брюшном тифе и паратифах -реакция Видаля и т.д.);
2) определения возбудителя, выделенного от больного;
3) определения групп крови с исп-ем моноклональных антител.








Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) реакция связывания антителами корпускулярных антигенов (бактерий, эритроцитов или других клеток,

Слайд 6
Схема

реакции агглютинации
,

Схема реакции агглютинации,

Слайд 7Ориентировочная реакция агглютинации
Определение (серотипирование) возбудителя, выделенного от больного.


На предметном

стекле:
капля диагностической агглютинирующей сыворотки (антитела) в разведении 1:10 или

1:20
+
чистая культура возбудителя, выделенного от больного.

Контроль: вместо сыворотки - каплю раствора натрия хлорида.

При появлении хлопьевидного осадка ставят развернутую реакцию агглютинации




Ориентировочная реакция агглютинации Определение (серотипирование) возбудителя, выделенного от больного.На предметном стекле: капля диагностической агглютинирующей сыворотки (антитела) в

Слайд 8Развернутая реакция агглютинации
Определение (серотипирование) возбудителя, выделенного от больного.


Разведения агглютинирующей

сыворотки

+
2—3 капли взвеси возбудителя.

Агглютинацию учитывают по количеству осадка и степени просветления жидкости.

Реакция положительная, если агглютинация отмечается в разведении, близком к титру диагностической сыворотки.

Контроли: сыворотка + р-рNaCl - должна быть прозрачной,
взвесь микробов + р-рNaCl - равномерно мутной, без осадка.







Развернутая реакция агглютинации Определение (серотипирование) возбудителя, выделенного от больного.Разведения агглютинирующей сыворотки

Слайд 9
Развернутая реакция агглютинации.
Определение у больного антител.

Разведения сыворотки крови

больного

+
Диагностикум (взвесь убитых микробов)

инкубация при 37 °С

Отмечают наибольшее разведение сыворотки (титр сыворотки), при котором произошла агглютинация (осадок).

Характер и скорость агглютинации зависят от вида антигена и антител:

0-диагностикум
(бактерии, убитые нагреванием, => 0-антиген)
- мелкозернистая агглютинация.
Н-диагностикум
(бактерии, убитые формалином, => Н-антиген)
- крупнохлопчатая агглютинация,
протекает быстрее.
Развернутая реакция агглютинации. Определение у больного антител. Разведения сыворотки крови больного

Слайд 10Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА)
Определение у больного антител.




Сыворотка больного

+
Антигенный эритроцитарный диагностикум
(эритроциты с адсорбированными на них антигенами).
Результат: склеивание и выпадение эритроцитов на дно ячейки в виде фестончатого осадка.
Отрицательная реакция: эритроциты оседают в виде «пуговки».

Реакция обратной непрямой гемагглютинации (РОНГА)
Например, обнаружение ботулинического токсина (+эритроцитарный антительный ботулинический диагностикум).

Применение РНГА:
диагностика инфекционных болезней,
определения гонадотропного гормона в моче (беременность),
выявление повышенной чувствительности к лекарственным препаратам, гормонам и др.
Реакция непрямой (пассивной) гемагглютинации (РНГА, РПГА) Определение у больного антител. Сыворотка больного

Слайд 12
Реакция коагглютинации.


Принцип: стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к

Fc-фрагменту иммуноглобулинов, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые затем взаимодействуют активными

центрами с соответствующими микробами, выделенными от больных.
Стафилококки
+
Иммунная диагностическая
сыворотка (предварительно)
+
Микробы, выделенные от
больных (антигены)


Результ: хлопья, состоящие из стафилококков, антител диагностической сыворотки и определяемого микроба.
Реакция коагглютинации. Принцип: стафилококки, содержащие белок А, имеющий сродство к Fc-фрагменту иммуноглобулинов, неспецифически адсорбируют антимикробные антитела, которые

Слайд 13
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА)
Принцип: блокирование антигенов вирусов антителами иммунной

сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство агглютинировать эритроциты.


Применение: диагностика

многих вирусных болезней, возбудители которых (вирусы гриппа, кори, краснухи, клещевого энцефалита и др.) могут агглютинировать эритроциты различных животных.

Вирусы








Эритроциты Антивирусные АТ Нейтрализация вирусов
животного
Реакция торможения гемагглютинации (РТГА) Принцип: блокирование антигенов вирусов антителами иммунной сыворотки, в результате чего вирусы теряют свойство

Слайд 14
Реакция агглютинации для определения антирезусных антител
(непрямая реакция Кумбса)




Обнаружение неполных антител.
Они специфически взаимодействуют с резусположительными
эритроцитами (антигены), но

не вызывают их агглютинации.

антирезусные антитела
+
резус-положительные эритроциты
+
антиглобулиновая сыворотка
(антитела против иммуноглобулинов человека)

Результат: агглютинация эритроцитов.
Применение: диагностика патологических состояний, связанных с внутрисосудистым лизисом эритроцитов (ГБН: эритроциты резус-положительного плода соединяются с циркулирующими в крови неполными антителами к резус-фактору, которые перешли через плаценту от резус-отрицательной матери).
Реакция агглютинации для определения антирезусных антител (непрямая реакция Кумбса) Обнаружение неполных антител.Они специфически взаимодействуют с резусположительными

Слайд 15
Схема реакции Кумбса

Схема реакции Кумбса

Слайд 16
Реакция преципитации (от лат. praecipito - осаждать)


- формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами

в виде помутнения (преципитата).

Образуется при смешивании АГ и АТ в эквивалентных количествах (избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса).

Варианты постановки:
в пробирках,
в гелях,
в питательных средах и др.


Реакция преципитации (от лат. praecipito - осаждать)   - формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена

Слайд 17Реакция кольцепреципитации.
Проводят в узких преципитационных пробирках:
на иммунную сыворотку наслаивают

растворимый антиген.
Результат: образуется непрозрачное кольцо преципитата


Реакция Асколи (при

сибирской язве)
В качестве антигенов - прокипяченные и профильтрованные водные экстракты органов или тканей.
Реакция кольцепреципитации.Проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. Результат: образуется непрозрачное кольцо преципитата

Слайд 18
Реакция двойной иммунодиффузии
по Оухтерлони.


Постановка:
1. растопленный агаровый гель

тонким слоем выливают на стеклянную пластинку
2. после затвердевания в

геле вырезают лунки (2-3 мм).
3. в лунки раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу.

Результат: в месте встречи образуется преципитат в виде белой полосы. (у идентичных антигенов линии преципитата сливаются; у неидентичных – пересекаются).

Применяется для
обнаружения
дифтерийной палочки.



Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Постановка:1. растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку 2.

Слайд 19
Реакция радиальной иммунодиффузии.


Постановка:
1. иммунная сыворотка +

расплавленный агаровый гель равномерно наливают на стекло.
2. после застывания

делают лунки
3. в лунки помещают антиген.

Результат: образование кольцевых зон преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца пропорционален концентрации антигена.

Используется для определения содержания в крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.
Реакция  радиальной  иммунодиффузии. Постановка: 1. иммунная сыворотка + расплавленный агаровый гель равномерно наливают на стекло.

Слайд 20Реакция радиальной иммунодиффузии
по Манчини












100 50 25 12.5
Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини

Слайд 21Реакция радиальной иммунодиффузии
по Манчини













Реакция радиальной иммунодиффузии по Манчини

Слайд 22
Реакции с участием комплемента


- основаны на активации комплемента комплексом АГ-АТ.













Реакции с участием комплемента- основаны на активации комплемента комплексом АГ-АТ.

Слайд 23Реакция связывания комплемента (РСК)


Принцип:
АГ-АТ(Fc-фрагмент) + Комплемент = связывание


Комплемента.

Постановка в две фазы:
1-я фаза - инкубация смеси антиген + антитело + комплемент;
2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента; добавляем гемолитическую систему (эритроциты барана + гемолиткческая сыворотка с антителами к ним).



Реакция связывания комплемента (РСК)Принцип: АГ-АТ(Fc-фрагмент) + Комплемент = связывание

Слайд 24






Оценка результатов:
реакция отрицательная –
свободный комплемент +

комплекс эритроцит - антиэритроцитарное антитело = гемолиз;.
реакция положительная - связанный

комплемент не вызывает гемолиза.

Применение РСК - диагностика инфекционных болезней
(сифилис - реакция Вассермана,
гонококки – реакция Борде-Жанга)
Оценка результатов:реакция отрицательная –   свободный комплемент + комплекс эритроцит - антиэритроцитарное антитело = гемолиз;.реакция положительная

Слайд 25
Реакции иммунного лизиса


Принцип:
АТ-АГ + комплемент = лизис клеток
(активация системы

комплемента по классическому пути).

Разновидности:
реакция гемолиза
реакция бактериолиза

Реакции иммунного лизисаПринцип:АТ-АГ + комплемент = лизис клеток (активация системы комплемента по классическому пути).Разновидности:реакция гемолизареакция бактериолиза

Слайд 26
Реакция радиального гемолиза (РРГ)


Постановка:
1. гель из агара + эритроциты

барана (с адсорбированными антигенами вируса) + комплемент
2. делаем лунки
3. вносим

в лунку сыворотку больного (АТ против вируса)

Результат: вокруг лунки образуется зона гемолиза.

Определяем антитела в сыворотке крови у больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом.
Реакция радиального гемолиза (РРГ)Постановка: 1. гель из агара + эритроциты барана (с адсорбированными антигенами вируса) + комплемент2.

Слайд 27
Реакция бактериолиза


Принцип: антитела-лизины в присутствии комплемента способны растворять микробы и

другие клеточные элементы.

Постановка: сыворотку б-го разводим бульоном

+
взвесь живых холерных вибрионов

Результат: бульон прозрачный (произошел лизис микробов)
Применяется для диагностики холеры.

Реакция бактериолизаПринцип: антитела-лизины в присутствии комплемента способны растворять микробы и другие клеточные элементы.Постановка: сыворотку б-го разводим бульоном

Слайд 28Реакции с использованием меченых антител или антигенов

Реакции с использованием меченых  антител или антигенов

Слайд 29
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)



Основные разновидности

метода:
прямой,
непрямой,
с комплементом.

Является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов

микробов или определения антител.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)Основные разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом.Является методом экспресс-диагностики

Слайд 30
Прямой метод РИФ


Принцип: АГ + АТ (меченные флюорохромами)

= АГ-АТ светится

в УФ-лучах люминесцентного микроскопа.

Результат: бактерии в мазке светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.

Прямой метод РИФ Принцип:  АГ + АТ (меченные флюорохромами) = АГ-АТ светится

Слайд 31
Непрямой метод РИФ


Принцип: выявление АГ-АТ с помощью антиглобулиновой сыворотки,

меченной флюорохромом.

Постановка:
мазок из взвеси микробов + диагностическая

сыворотка (антитела)
антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают
АГ-АТ + антиглобулиновая (против АТ) сыворотка, меченная флюорохромами

Результат: образуется комплекс АГ-АТ-антиАТ(флюорохром),
который наблюдают в люминесцентном микроскопе.

Преимущества: можно применять разные диагностические сыворотки.
Непрямой метод РИФ Принцип: выявление АГ-АТ с помощью антиглобулиновой сыворотки, меченной флюорохромом. Постановка: мазок из взвеси микробов

Слайд 32




Прямой метод







Непрямой метод

Прямой методНепрямой метод

Слайд 33Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Препарат риккетсий

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Препарат риккетсий

Слайд 34Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) T.pallidum

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) T.pallidum

Слайд 35
Иммуноферментный анализ (ИФА)


Принцип: выявление АГ с помощью АТ+фермент-метка (пероксидаза хрена,

бета-галактозидаза или щелочная фосфатаза).

АГ-АТ-фермент + Хромоген -> изменение цвета

продукта реакции

Интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

Иммуноферментный анализ (ИФА)Принцип: выявление АГ с помощью АТ+фермент-метка (пероксидаза хрена, бета-галактозидаза или щелочная фосфатаза). АГ-АТ-фермент + Хромоген

Слайд 36
Иммуноферментный анализ (ИФА)









Применение:
диагностика вирусных, бактериальных и паразитарных болезней (ВИЧ-инфекций, гепатита

В и др.),
определени гормонов, ферментов, лекарственных препаратов, содержащихся в

исследуемом материале в минорных концентрациях.
Иммуноферментный анализ (ИФА)Применение:диагностика вирусных, бактериальных и паразитарных болезней (ВИЧ-инфекций, гепатита В и др.), определени гормонов, ферментов, лекарственных

Слайд 37
Твердофазный ИФА

Принцип: один из компонентов иммунной
реакции (антиген или

антитела) сорбирован
на твердом носителе
(в лунках планшеток из полистирола).

Постановка: в

лунки планшеток с сорбированным антигеном
+
сыворотка больного
+
антиглобулиновая сыворотка (меченная ферментом)
+
хромоген.
После добавления очередного компонента - тщательная промывка (удаление несвязавшихся реагентов)
Результат: изменение цвета раствора хромогена.
Твердофазный ИФА Принцип: один из компонентов иммунной реакции (антиген или антитела) сорбирован на твердом носителе(в лунках планшеток

Слайд 38
Конкурентный вариант ИФА

Принцип:
искомый АГ и меченный ферментом АГ конкурируют

друг с другом за связывание ограниченного количества антител иммунной сыворотки,


искомые АТ и меченые АТ конкурируют друг с другом за антигены.
Интенсивность окраски обратно пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.
Конкурентный вариант ИФАПринцип: искомый АГ и меченный ферментом АГ конкурируют друг с другом за связывание ограниченного количества

Слайд 39Твердофазный ИФА (конкурентный и неконкурентный)

Твердофазный ИФА  (конкурентный и неконкурентный)

Слайд 40
Радиоиммунологический анализ (РИА)

Принцип: применение антигенов или антител, меченных радионуклидом. Образуется

радиоактивный ИК. Его радиоактивность определяют в соответствующем счетчике (бета- или

гамма-излучение).

Интенсивность излучения прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул АГ и АТ.

Модификации:
твердофозный РИА
конкурентный РИА.

Метод представляет определенную экологическую опасность.
Радиоиммунологический анализ (РИА)Принцип: применение антигенов или антител, меченных радионуклидом. Образуется радиоактивный ИК. Его радиоактивность определяют в соответствующем

Слайд 41Иммуноблоттинг (от англ. blot, пятно)
сочетание электрофореза и ИФА или

РИА.
Высокочувствительный метод

Принцип. Антиген выделяют с помощью электрофореза и переносят его

на активированную бумагу или нитроцеллюлозную мембрану и проявляют с помощью ИФА.

Постановка: полоски с «блотами» антигенов
+
сыворотка больного
+
антииммуноглобулиновая сыворотка (фермент)
+
хромоген

Результат: изменение
окраски хромогена под
действием фермента


Используется как диагностический
метод при ВИЧ-инфекции и др.
Иммуноблоттинг (от англ. blot, пятно) сочетание электрофореза и ИФА или РИА.Высокочувствительный методПринцип. Антиген выделяют с помощью электрофореза

Слайд 42



СПАСИБО за ВНИМАНИЕ!

СПАСИБО за ВНИМАНИЕ!

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика