Ультрацентрифугирование (седиментация) Методы разделения и очистки биомолекул

коллоидных растворов и определения их размеров была впервые предложена российским

химиком Думанским еще в 1913 году.
10-20 лет тому назад скоростные ультрацентрифуги составляли едва ли не главную часть приборного оснащения любой биохимической лаборатории.
Сейчас, когда молекулярная биология перешла на работу с микроколичествами исходных материалов, эти дорогие и капризные машины заняли куда более скромное место в арсенале исследователей. Тем не менее, в некоторых случаях, когда предполагается начать обширную программу изучения какого-нибудь однородного биологического материала, имеет смысл воспользоваться возможностями ультрацентрифугирования. Поэтому в этой главе мы весьма кратко познакомимся с этими возможностями.

скорости вращения своих роторов вплоть до 80 тысяч оборотов в

минуту.

Вращение с такой скоростью невозможно осуществить в нормальной атмосфере из-за катастрофического разогрева ротора. Поэтому главным элементом конструкции ультрацентрифуги является вакуумная камера, в которой вращается ротор.

силы тяжести или центробежной силы.

Если седиментация осуществляется с использованием высокоскоростной

центрифуги (ультрацентрифуги), используется термин ультрацентрифугирование.

Метод позволяет:

- определить Мr, плотность и форму макромолекул,

- разделить смесь веществ на компоненты для аналитических и препаративных целей

под действием центробежных сил. Через определенные промежутки времени определяют распределение

частиц по длине пробирки.

собой зону чистого растворителя. Исследуют смещение границы между растворителем и

раствором.

Зональное ультрацентрифугирование – образец наносится в виде слоя на поверхность более плотного растворителя. Различные компоненты будут разделяться в виде серии зон (полос), которые осаждаются только через растворитель отдельно одна от другой.

плотная частица (с меньшим объемом) будет двигаться быстрее, чем менее

плотная

3. Чем больше плотность раствора, тем медленнее движение частиц

4. Чем больше коэффициент трения, тем медленнее движение частиц

собой зону чистого растворителя. Исследуют смещение границы между растворителем и

раствором.

на том, что луч света не отклоняется при прохождении через

область с однородной концентрацией, но отклоняется, проходя через участок с изменяющейся концентрацией, вследствие изменения показателя преломления.

двухсекторную ячейку, один из секторов которой содержит только растворитель, другой

– раствор. При прохождении света через оба сектора получается оптическая интерферен-ционная картина.

поглощение света определенной длины волны, соответствующей максимуму поглощения исследуемых биомолекул,

по длине ячейки.

*10-5 с-1
W = 2p* 33000 /60

= 3,45*103

рад/с

W2 = 1,19*107

S = 30,1 *10-13 с

тем больше S.
2. Чем больше скорость вращения центрифуги, тем больше

S.
3. Заряженные частицы имеют меньший S, чем незаряженные.
4. Частицы с вытянутой формой проявляют меньший S.
5. Чем больше Mr, тем больше S.

(белки), либо в градиенте плотности CsCl (ДНК)