Вирусы-особая форма жизни

белоксинтезирующей системы и способные к воспроизведению лишь в клетках высокоорганизованных

форм жизни (облигатные внутриклеточные паразиты).

с рядом причин:
- ведущей ролью вирусов в инфекционной патологии человека

(вирус гриппа, ВИЧ, цитомегаловирус и другие герпесвирусы) на фоне практически полного отсутствия средств специфической химиотерапии;
- использованием вирусов для решения многих фундаментальных вопросов биологии и генетики.

живого мира.
1.Ультрамикроскопические размеры (измеряются в нанометрах). Крупные вирусы (вирус оспы)

могут достигать размеров 300 нм, мелкие- от 20 до 40 нм. 1мм=1000мкм, 1мкм=1000нм.
2.Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только одного типа- или ДНК (ДНК- вирусы) или РНК (РНК- вирусы).У всех остальных организмов геном представлен ДНК, так и РНК.
3.Вирусы не способны к росту и бинарному делению.
4.Вирусы размножаются путем воспроизводства себя в инфицированной клетке хозяина за счет собственной геномной нуклеиновой кислоты.
5.У вирусов нет собственных систем мобилизации энергии и белок- синтезирующих систем, в связи с чем вирусы являются абсолютными внутриклеточными паразитами.
6.Средой обитания вирусов являются живые клетки - бактерии (это вирусы бактерий/бактериофаги), клетки растений, животных и человека.

этих представителей микромира основана на характеристике вирионов - конечной фазы

развития вирусов.

вида обычно используют специальные названия, например — вирус краснухи, вирус

иммунодефицита человека- ВИЧ, вирус парагриппа человека типа 1 и т.д.

(у большинства РНК- вирусов) или двухцепочечными молекулами ДНК (у большинства

ДНК- вирусов).
2. Капсид — белковая оболочка, в которую упакована геномная нуклеиновая кислота. Капсид состоит из идентичных белковых субъединиц- капсомеров. Существуют два способа упаковки капсомеров в капсид- спиральный (спиральные вирусы) и кубический (сферические вирусы).

также по спирали, уложена геномная нуклеиновая кислота. 
При кубическом типе симметрии

вирионы могут быть в виде многогранников, чаще всего- двадцатигранники — икосаэдры.

и называются “голыми”.
4. У других вирусов поверх капсида есть дополнительная

мембраноподобная оболочка, приобретаемая вирусом в момент выхода из клетки хозяина- суперкапсид. Такие вирусы называют “одетыми”.

со взаимодействием специфических рецепторов вируса и хозяина (у вируса гриппа- гемагглютинин, у

вируса иммунодефицита человека- гликопротеин gp 120).
2.Проникновение- путем слияния суперкапсида с мембраной клетки или путем эндоцитоза (пиноцитоза).
3.Освобождение нуклеиновых кислот- “раздевание” нуклеокапсида и активация нуклеиновой кислоты.
4.Синтез нуклеиновых кислот и вирусных белков, т.е. подчинение систем клетки хозяина и их работа на воспроизводство вируса.
5.Сборка вирионов- ассоциация реплицированных копий вирусной нуклеиновой кислоты с капсидным белком.
6.Выход вирусных частиц из клетки, приобретения суперкапсида оболочечными вирусами.

от вируса:
- при инфицировании дефектным вирусом, для репликации которого нужен вирус -

помощник, самостоятельная репликация этих вирусов невозможна ( так называемые вирусоиды). Например, вирус дельта (D) гепатита может реплицироваться только при наличии вируса гепатита B, его Hbs — антигена, аденоассоциированный вирус- в присутствии аденовируса);
- при инфицировании вирусом генетически нечувствительных к нему клеток;
- при заражении чувствительных клеток вирусом в неразрешающих условиях.

интенсивного размножения и формирования большого количества вирусных частиц — характерный

результат продуктивного процесса, вызванного вирусами с высокой цитопатогенностью (носит достаточно узнаваемый специфический характер);

- стабильное взаимодействие, не приводящее к гибели клетки (персистирующие , хронические, медленные, латентные инфекции) — вирусная трансформация клетки.

реплицируется вместе с геномом клетки хозяина и может длительно находиться

в латентном состоянии. Встраиваться в ДНК- геном хозяина могут только ДНК- вирусы (принцип “ДНК- в ДНК”). Единственные РНК- вирусы, способные интегрироваться в геном клетки хозяина- ретровирусы, имеют для этого специальный механизм (синтез ДНК провируса на основе геномной РНК с помощью фермента обратной транскриптазы с последующим встраиванием ДНК в геном хозяина).

и не содержит вирусных частиц.
Хроническая - клетка продолжает длительно продуцировать

вирусные частицы и передавать эту способность дочерним клеткам.

ВДП, местная инфекция
2. ВДП-входные ворота, без местных проявлений- генерализация (ветряная

оспа, корь, паротит)
Пищевой: энтеровирусы, реовирусы
Трансмиссивно: арбовирусы
Транскутанно: бешенство, папиллома
Половой: герпес-вирусы
Парентеральный: гепатиты
Вертикальный: герпес, краснуха

культурах — основной метод.

выращивается в искусственных условиях и предназначается для культивирования вирусов. По

длительности жизни клеточные культуры подразделяются на:
1) первичные;
2) полуперевиваемые;
3) перевиваемые.

их ферментативной дезинтеграции. Кусочки ткани помещают в 0,25 % раствор

трипсина при температуре 37˚С и периодически перемешивают. В результате этого происходит отделение клеток ткани друг от друга. Порции клеток собирают по мере их отделения, центрифугируют, трипсин сливают, вносят среду роста и суспендируют в ней клетки. Первичные культуры клеток могут претерпевать до 10 делений in vitro, обладают высокой чувствительностью ко многим вирусам, могут быть получены в большом количестве, безопасны в онкогенном отношении. Недостаток: трудоёмкость и длительность получения, а также возможная контаминация латентными вирусами. К первичным культурам клеток относятся клетки почки эмбриона человека, макаки резус, эмбриона свиньи, фибробласты куриных эмбрионов.

способны претерпевать in vitro до 100 делений, сохраняя при этом

исходный диплоидный набор хромосом. К полуперевиваемым культурам клеток относятся фибробласты эмбриона человека. Эти клетки чрезвычайно требовательны к условиям культивирования, поэтому в практике вирусологических лабораторий имеют ограниченное применение.

человека и животных с изменённым кариотипом, способные к неограниченному росту

в условиях in vitro. Перевиваемые культуры клеток просты при культивировании, в связи с чем широко используются при лабораторной диагностике вирусных заболеваний у человека. К перевиваемым культурам клеток относятся линии НеLа (клетки карциномы шейки матки человека), КВ (клетки карциномы полости рта человека), Vero (клетки почки зеленой мартышки), СПЭВ (клетки почки эмбриона свиньи) и др.

фармакологии
Линия была получена 8 февраля 1951 года из раковой опухоли шейки матки пациентки

по имени Генриетта Лакс (англ. Henrietta Lacks), умершей от этого заболевания 4 октября того же года.
Клетки из опухолевого образования Генриетты были изъяты без её ведома и согласия исследователем Джорджом Гейем, который обнаружил, что в них можно поддерживать жизнь. Ему удалось выделить одну конкретную клетку, умножить её и начать клеточную линию. Он назвал их клетками HeLa, по начальным буквам имени Генриетты Лакс. Это первые клетки, выращенные в лаборатории, которые были «бессмертными» — они не погибали после нескольких делений и могли быть использованы во многих экспериментах.
Особенности
Клетки HeLa называют «бессмертными», они способны делиться бесконечное число раз, в отличие от обычных клеток, имеющих предел Хейфлика. Это происходит потому, что как и при многих типах раковых опухолей, клетки HeLa производятфермент теломеразу, которая наращивает теломеры на концах ДНК хромосом. Существующая по сей день популяция клеток HeLa унаследована от образцов ткани, извлечённой у Генриетты Лакс. Эти клетки пролиферируют необычайно быстро, даже в сравнении с другими раковыми клетками. Иногда эти клетки заражают культуры других клеток.
Клетки HeLa были с самого начала заражены вирусом папилломы, что часто случается с клетками рака, от которого умерла Генриетта. Клетки HeLa обладают аномальным кариотипом, различные сублинии HeLa имеют 49 — 78 хромосом, в отличие от нормального кариотипа человека, содержащего 46 хромосом.
Клетки HeLa эволюционировали за эти годы, адаптируясь к росту in vitro, и по причине их разделения возникло несколько ветвей. На данный момент существует несколько линий клеток HeLa, все они происходят от общего предка, эти линии клеток используют, в том числе в качестве модели раковых клеток, для исследования механизмов передачи сигнала между клетками и для других применений.

состава с факторами роста- среда 199, Игла, раствор Хэнкса, гидролизат

лактальбумина. В среды добавляют стабилизаторы рН (Hepes), различные в видовом отношении сыворотки крови (наиболее эффективной считают эмбриональную телячью сыворотку), L-цистеин и L-глютамин.
В зависимости от функционального использования среды могут быть ростовые (с большим содержанием сыворотки крови) — их используют для выращивания клеточных культур до внесения вирусных проб, и поддерживающие (с меньшим содержанием сыворотки или ее отсутствием)- для содержания инфицированных вирусом клеточных культур.

условиях в специальных плоских стеклянных сосудах – матрацах, в которые

вносится питательная среда. На дне матраца клетки при своем размножении образуют монослой.

эмбрионы в возрасте от 5 до 14 дней. Перед заражением

куриные эмбрионы овоскопируют: определяют их жизнеспособность, отмечают на скорлупе границу воздушного мешка и месторасположение эмбриона («темный глаз» эмбриона). Работа с куриными эмбрионами проводится в стерильном боксе стерильными инструментами (пинцеты, шприцы, ножницы, копье и др.). После выполнения фрагмента работы инструменты погружают в 70 % этиловый спирт и перед следующей манипуляцией прожигают. Перед заражением скорлупу куриного эмбриона протирают горящим спиртовым тампоном и спиртовым раствором йода. Объем исследуемого материала, вводимого в эмбрион, составляет 0,1-0,2 мл. Для выделения вирусов из одного материала используют не менее 4 куриных эмбрионов.
После заражения эмбрионы инкубируют в термостате, располагая тупым концом кверху. Температура и продолжительность инкубации зависят от биологических свойств изолируемого вируса. По окончании инкубации эмбрионы охлаждают при +4˚С 16-18 ч. После этого куриный эмбрион стерильно вскрывают, вырезая в скорлупе отверстие над воздушным мешком выше обозначенной границы. Пастеровской пипеткой или шприцем отсасывают аллантоисную, затем амниотическую жидкость, разрезают хорион-аллантоисную оболочку для изучения, остальное содержимое яйца извлекают в чашку Петри. Аллантоисная и амниотическая жидкости используются для индикации вирусов.

установления их принадлежности к семейству, роду, виду или сероварианту.

вирусов в культурах клеток сопровождается нарушениями морфологии клеток монослоя. Некоторые

вирусы вызывают характерные цитопатические изменения, что позволяет быстро поставить предварительный диагноз.

характерных образований — скоплений вирусных белков или частиц, видимых в

световой микроскоп. Тельца включений могут располагаться как в цитоплазме (тельца Гварнери при оспе), так и в ядрах клеток (аденовирусы).

страдающих коровьей или натуральной оспой.

слюнных желез также быстрым методом диагностики бешенства.
В одной клетке может

быть одно или несколько телец. Они окружены четко очерченной оболочкой и имеют внутреннюю структуру в виде базофильной зернистости, чаще располагаются около ядра.

выглядящие как зоны просветления на монослоях клеток, покрытых слоем агара.

В некоторых случаях дозу и цитопатогенность вируса выражают в бляшкообразуюших единицах (БОЕ).

клеток, зараженных вирусом. Чаще это явление наблюдают у гемагглютинирующих вирусов.

Чтобы наблюдать гемадсорбцию, из пробирки с зараженной вирусом культурой клеток удаляют культуральную жидкость и вносят 0,5%-ную взвесь эритроцитов, оставляют на 5—10 мин, затем слой клеток споласкивают физиологическим раствором (чтобы смыть эритроциты).
Если в зараженной культуре клеток идет репродукция вируса, то на таких клетках под малым увеличением микроскопа можно видеть адсорбировавшие эритроциты, в контрольных (незараженных) культурах клеток таковые отсутствуют.

в качестве индикатора рН феноловый красный, при оптимальных для клеток

условиях культивирования (рН около 7,2)- красный.
Размножение клеток, не зараженных вирусом, меняет рН и соответственно- цвет среды с красного на желтый за счет смещения рН в кислую сторону.
При размножении в клеточных культурах вирусов происходит лизис клеток, изменения рН и цвета среды не происходит.

свидетельствует развитие симптомов заболевания или гибель животного.

их вариантной, видовой, родовой и семейственной принадлежности. Идентификация вирусов проводится

по принципу: определение неизвестного по известному. Известным компонентом при идентификации вирусов являются специфические противовирусные сыворотки (противогриппозные, противокоревые и др.), которые используют в серологических реакциях нейтрализации (РН), торможения гемадсорбции (РТГадс), торможения гемагглютинации (РТГА), РПГА, РСК, а также при ИФА и РИА. Эти сыворотки содержат специфические противовирусные антитела и называются диагностическими.

материалом чувствительных живых систем;
индикация вирусов в живых системах;
титрование

выделенных вирусов;
идентификация вирусов в иммунных реакциях.

1. Отбор материала для исследования. Проводится в ранние сроки заболевания при соблюдении правил, предотвращающих контаминацию материала посторонней микрофлорой и инфицирование медицинского персонала. Для предупреждения инактивации вирусов при транспортировке материала, он помещается в вирусную транспортировочную среду (ВТС), состоящую из сбалансированного солевого раствора, антибиотиков и сывороточного альбумина. Транспортируется материал в специальном контейнере с термоизоляцией и закрытыми пластиковыми пакетами, содержащими лед. При необходимости материал хранят при -20˚С. Каждый образец материала для исследования должен иметь маркировку и этикетку с указанием фамилии больного, типа материала, даты его забора, развернутый клинический диагноз и другие сведения.

сопутствующей бактериальной микрофлоры (фильтрование; центрифугирование, обработка эфиром, внесение антибиотиков).
3. Заражение

материалом чувствительных живых систем.

культуры клеток амниона человека, зараженных вирусом кори: зоны локализации вирусного

антигена обладают зеленоватым свечением