Разделы презентаций


ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК

Содержание

ЛитератураКутлунина Н.А., Ермошин А.А. Молекулярно-генетические методы в исследовании растений : учеб.-метод. пособие. М-во образования и науки Рос. Федерации, Урал. федер. ун-т. – Екатеринбург : Изд-во Урал. ун-та, 2017. – 142 с.Методы

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК

ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК

Слайд 2Литература
Кутлунина Н.А., Ермошин А.А. Молекулярно-генетические методы в исследовании растений :

учеб.-метод. пособие. М-во образования и науки Рос. Федерации, Урал. федер.

ун-т. – Екатеринбург : Изд-во Урал. ун-та, 2017. – 142 с.

Методы выделения ДНК из биологического материала https://vmtbio.ru/isolation-dna/
ЛитератураКутлунина Н.А., Ермошин А.А. Молекулярно-генетические методы в исследовании растений : учеб.-метод. пособие. М-во образования и науки Рос.

Слайд 3Работа с реактивами
Обращайте внимание на маркировку.
Используйте только подписанные реактивы.
При необходимости

отмечайте дату вскрытия емкости с реактивом для учета длительности хранения.
На

банке с реактивом указывают:
Название и молекулярная формула;
Каталожный номер и название фирмы;
Номер партии;
Дата, до которой продукт годен к употреблению;
Условия хранения.

Работа с реактивамиОбращайте внимание на маркировку.Используйте только подписанные реактивы.При необходимости отмечайте дату вскрытия емкости с реактивом для

Слайд 4Взвешивание
Если при взвешивании реактив (объект) попал на весы:

НЕ НАДО ЕГО СДУВАТЬ!

Следует
аккуратно снять чашку (и, если

надо, верхний кожух весов);
вымыть кожух и насухо его протереть;
весы протереть влажной тряпкой/салфеткой, насухо вытереть;
всё собрать.

Взвешивание  Если при взвешивании реактив (объект) попал на весы: НЕ НАДО ЕГО СДУВАТЬ! Следует аккуратно снять

Слайд 5Автоматическая пипетка
Внимательно работайте с горячими, холодными, вязкими растворами и растворами

с небольшим поверхностным натяжением.
Отбор неправильного объёма жидкости (некачественный наконечник,

не сразу коснулся жидкости, закупорился). Следует контролировать работу пипетки "на глаз".
Обращайте внимание, чтобы наконечник не касался ничего лишнего своей внешней поверхностью.
Автоматическая пипеткаВнимательно работайте с горячими, холодными, вязкими растворами и растворами с небольшим поверхностным натяжением. Отбор неправильного объёма

Слайд 6Автоматическая пипетка
Правила работы:
Отжать пипетку до первого упора;
Отбирать

жидкость с поверхности, наконечник глубоко не опускать;
Выдавливать жидкость,

отжав пипетку до второго упора (по возможности на стенку пробирки или на поверхность жидкости).

Для того чтобы жидкость не попала внутрь автоматической пипетки:
Плавно отпускать поршень вверх;
Не класть на стол пипетку с надетым наконечником;
Не сбрасывать наконечник с жидкостью.

Автоматическая пипеткаПравила работы: Отжать пипетку до первого упора; Отбирать жидкость с поверхности, наконечник глубоко не опускать; Выдавливать

Слайд 10Ламинар-бокс
Лабораторный прибор для работы с биологическими объектами в стерильных

условиях.
Шкаф, оборудованный осветителями, ультрафиолетовыми лампами и системой подачи

стерильного воздуха.
Используется в микробиологических, молекулярно-биологических работах, работах с культурой клеток, тканей и органов.
Стерильный воздух подаётся в бокс ламинарным потоком (равномерное движение воздуха без завихрений).

Ламинар-бокс Лабораторный прибор для работы с биологическими объектами в стерильных условиях. Шкаф, оборудованный осветителями, ультрафиолетовыми лампами и

Слайд 11Зачем выделять НК?
Выделение ДНК и РНК — важный шаг

подготовки проб перед биохимическими и диагностическими процессами.

Амплификация, проведение обратной

транскрипции, детектирование накопления продуктов амплификации методом ПЦР в реальном времени, клонирование, синтез ДНК и др. процедуры, выполняют на биологических образцах с предварительно выделенными и очищенными нуклеиновыми кислотами (НК).
Зачем выделять НК? Выделение ДНК и РНК — важный шаг подготовки проб перед биохимическими и диагностическими процессами.

Слайд 12ПЦР
ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой реакцию синтеза комплементарной цепочки

ДНК на ДНК матрице, катализируемую ферментом ДНК-зависимой ДНК-полимеразой.
Фермент термостабильный

– он может выдерживать высокие температуры, необходимые на этапе денатурации. Оптимум работы полимеразы составляет около 72°C. Для создания оптимальных условий синтеза образец ДНК помещается в так называемую реакционную смесь .

Американский биохимик Кэрри Муллис – нобелевский лауреат 1993 г. в области химии (совместно с
Майклом Смитом) за изобретение ПЦР

ПЦР ПЦР (полимеразная цепная реакция) представляет собой реакцию синтеза комплементарной цепочки ДНК на ДНК матрице, катализируемую ферментом

Слайд 13Ингибиторы ПЦР
Изменяют конформацию фермента, уменьшают его активность.

Ингибиторы ПЦРИзменяют конформацию фермента, уменьшают его активность.

Слайд 14Способы выделения НК
осаждение НК на суспензионный носитель;
выделение на колонках.

Традиционные методы выделения являются надежными и прошли испытание

временем, но сейчас на рынке имеется широкий ассортимент товаров, включая полные наборы, содержащие большинство реагентов, необходимых для выделения нуклеиновых кислот.
Большинство из них все же требует многократных этапов центрифугирования, которые сопровождаются удалением супернатанта. В последний годы повысился спрос на автоматические системы (выход НК и чистота материала, воспроизводимость и прогностичность эксперимента - максимальные, а риск контаминации (заражения) снижается.

Супернатант - фаза дисперсионной системы, которая располагается сверху от границы раздела фаз.

Способы выделения НКосаждение НК на суспензионный носитель;выделение на колонках.   Традиционные методы выделения являются надежными и

Слайд 15Способы выделение НК https://vmtbio.ru/isolation-dna/
Фенол-хлороформная экстракция (Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chloroform Extraction).
FTA-карты.
С помощью коммерческих наборов

(KITs)
Силикатные носители (Силика, Silica Matrices).
Стеклянные носители (Glass Particle).
Диатомит.
Очистка нуклеиновых кислот

с использованием магнитных микроносителей (Magnetic Bead Based Nucleic Acid Purification).
Анионообменные смолы.








Способы выделение НК https://vmtbio.ru/isolation-dna/Фенол-хлороформная экстракция (Guanidinium Thiocyanate-Phenol-Chloroform Extraction).FTA-карты.С помощью коммерческих наборов (KITs)Силикатные носители (Силика, Silica Matrices).Стеклянные носители

Слайд 16Растительный материал для выделения ДНК
Выделять ДНК можно из свежих или

замороженных (при минус 70–80 С) растительных образцов, из частей растений,

высушенных в силикагеле, или из гербарных образцов.
Для выделения ДНК обычно используют листья растений.
При выборе частей растения для выделения ДНК нужно выбирать участки, не пораженные грибковыми и другими заболеваниями, чтобы избежать загрязнения проб чужеродной ДНК.
Растительный материал для выделения ДНКВыделять ДНК можно из свежих или замороженных (при минус 70–80 С) растительных образцов,

Слайд 17Особенности выделения ДНК из растительных объектов
При выделении ДНК из растительных объектов

необходимо дезактивировать клеточные ферменты, «удалить» запасные вещества (полисахариды), вторичные метаболиты:

алкалоиды, фенольные соединения, терпены, которые мешают выделению ДНК и отрицательно влияют на её качество
В связи с многообразием метаболитов у представителей различных таксонов, а иногда и представителей одного рода растений, единого оптимального протокола изолирования ДНК не существует.
Особенности выделения ДНК из растительных объектовПри выделении ДНК из растительных объектов необходимо дезактивировать клеточные ферменты, «удалить» запасные

Слайд 18Особенности выделения ДНК из растительных объектов
В целом выделение ДНК включает обязательные

процедуры:

– разрушение клеток или лизис;
– удаление мембранных липидов;
– удаление вторичных

метаболитов и запасных веществ;
– удаление белков;
– удаление РНК;
– осаждение ДНК;
– растворение ДНК (хранение).
Особенности выделения ДНК из растительных объектовВ целом выделение ДНК включает обязательные процедуры:– разрушение клеток или лизис;– удаление

Слайд 19После экстракции целесообразно проверить качество выделенной НК, например, измерить концентрацию

с помощью флюориметра/спектрофотометра, провести гель-электрофорез или ПЦР со специальными праймерами

– факторами элонгации.

Флуориметр Qubit 2

После экстракции целесообразно проверить качество выделенной НК, например, измерить концентрацию с помощью флюориметра/спектрофотометра, провести гель-электрофорез или ПЦР

Слайд 20Список оборудования для выделения ДНК
Растительная ткань (замороженная жидким азотом, свежая

или высушенная)
Набор реагентов
Центрифуга для микропробирок
Вортекс (встряхиватель)
Микропипетки (20, 200, 1000 мкл)

и наконечники к ним
Штатив для пробирок объемом 1.5 или 2.0 мл
Микропробирки объемом 1.5 или 2.0 мл
Термостат
Перчатки одноразовые медицинские
Список оборудования для выделения ДНКРастительная ткань (замороженная жидким азотом, свежая или высушенная)Набор реагентовЦентрифуга для микропробирокВортекс (встряхиватель)Микропипетки (20,

Слайд 221 мл = 1000 мкл
на 100 проб

1 мл = 1000 мклна 100 проб

Слайд 231. Внесение образца

1. Внесение образца

Слайд 24Около 10 мг сухого образца

Около 10 мг сухого образца

Слайд 262. Лизис клеток

2. Лизис клеток

Слайд 27Не забыть: Перчатки одеть Добавить реагент Сбросить наконечник («тип») Закрыть пробирки, баночки с реактивами

Не забыть:  Перчатки одеть  Добавить реагент  Сбросить наконечник («тип»)  Закрыть пробирки,  баночки

Слайд 28Удаление РНК

Удаление РНК

Слайд 29Трясем через каждые 20 мин

Трясем через каждые 20 мин

Слайд 303. Осаждение белков

3. Осаждение белков

Слайд 324. Осаждение ДНК

4. Осаждение ДНК

Слайд 365. Промывка и растворение ДНК

5. Промывка и растворение ДНК

Слайд 38Хранение ДНК при температуре минус 20 С

Хранение ДНК при температуре минус 20 С

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика