Культивирование и выделение чистых культур анаэробов

придонный рост
3 – пристеночный рост
5 – диффузный рост

гвоздя…

МО, образующееся в результате размножения одной материнской клетки-предшественницы на плотной

питательной среде.
Чистая культура – популяция бактерий одного вида или одной разновидности, выращенная на питательной среде

окрашивают его по Граму, микроскопируют. Если бактерий много, то исследуемый

материал разводят в пробирке со стериальным изотоническим раствором NaCl. Исследуемый материал засевают в чашку Петри на плотную питательную среду и помещают в термостат (37 град.) на 18-24 ч.

изучают культуральные свойства бактерий. Для этого просматривают чашки и изучают

изолированные колонии, обращая внимание на их форму, величину, консистенцию и другие признаки. Для определения морфологии клеток и их тинкториальных свойств готовят мазок, окрашивают по Граму и микроскопируют.

культура характеризуется однородным ростом. При микроскопическом исследовании окрашенного мазка, приготовленного

из такой культуры, в нем обнаруживаются морфологические и тинкториальные однородные клетки.

особенности окрашивания с помощью простых и сложных методов окраски;
Культуральные признаки

– особенности роста МО на питательных средах;
Биохимические признаки – наличие у бактерий ферментов, необходимых для синтеза или расщепления различных химических соединений.

в видоспецифическим бактериофагам;
Видовая резистентность к определенным АБ;
Для патогенных бактерий –

продукция определенных факторов вирулентности.

облигатно-анаэробных бактерий, обязательным условием культивирования таких микроорганизмов является ограничение его

доступа. Существует ряд методов (механических, физических, биологических), которые позволяют это обеспечить.

регенерацию путем кипячения в течение 15-20 минут на водяной бане

с последующим быстрым охлаждением до 50 градусов. После посева поверхность среды заливают парафином или вазелиновым маслом. Так же, возможен посев в столбик плотной или полужидкой среды на глубину 10-12см. кислород с воздуха диффундирует на 1,5-2см, а в глубине создаются благоприятные условия.
Применение анаэростатов и анаэробных боксов.

натрия. Для связывания кислорода в 1л объема используют 100мл свежеприготовленного

20% Na2S2O4 и 16мл 50% КОН.
Для связывания остатков кислорода используют вещества-редуценты, к которым относится тиогликолевая кислота или тиогликолят натрия, аскорбиновая кислота, различные сахара, цистин и цистеин, муравьинокислый натрий и т.д.

на одну половину чашку засевают исследуемый материал, а на другую

– культуру аэробного или факультативно-анаэробного микроба, способного энергично поглощать кислород.
Помещают в среду кусочки печени, почек, мозга. При этом тканевые клетки активно поглощают и адсорбируют кислород, а в среде создаются анаэробные условия.

по поверхности плотной среды. Создают анаэробные условия. И инкубируют при

37 градусах 24-72ч. Изолированные колонии анаэробов пересевают на среду контроля стерильности или среду Китта-Тароцци.
Метод Вейнберга. Несколько капель исследуемого материала вносят в пробирку с 4-5мл изотонического раствора. Перемешивают запаянным капилляром переносят в пробирку с охлажденным до 45-50 градусов сахарным агаром, разлитым высоким столбиком. После перемешивания этим же капилляром засевают еще две пробирки с сахарным агаром и быстро охлаждают под струей воды. Выросшие в глубине колонии пересевают на СКС или среду Китта-Тароцци.
Метод Перетца. Готовят разведение материала, как указано выше. Содержимое пробирки с соответствующим разведением выливают в чашку Петри, на дне которой на двух палочках лежит стеклянная пластина 6х6см. среду заливают так, что бы она заполнила пространство между пластиной и дном чашки. При появлении роста пластинку поднимают и чистые колонии пересевают.