Слайд 1Занятие 9.
Митохондрии
Доронина Татьяна Валерьевна
2019 год
Московский государственный университет имени М.В.
Ломоносова
Биологический факультет
Кафедра клеточной биологии и гистологии
Слайд 3Методы выявления митохондрий в световой микроскоп
С помощью фазово-контрастной микроскопии
В живых
клетках с помощью витальных красителей (янус зеленый, родамин 123, некоторые
Mitotrackers)
Окраска по Альтману
Гистохимическая реакция на ферменты митохондрий
Иммуноцитохимическое выявление белков митохондрий
Слайд 4Окрашивание митохондрий флуоресцентным красителем родамином 123.
Фазовый контраст
Родамин
Слайд 6Гистохимическая реакция на сукцинатдегидрогеназу
СДГ – фермент цикла Кребса
Нефиксированные клетки инкубируются
в среде, содержащей сукцинат Na и соли неотетразолия
От субстрата отщепляется
H+ и переносится на тетразолий, восстанавливая его
Образуется нерастворимый осадок синего цвета – формазан
Митохондрии окрашиваются в синий цвет
Слайд 7Гистохимическая реакция на сукцинатдегидрогеназу
Слайд 8Окрашивание по Альтману
Осмиевая фиксация (хорошо сохраняет липиды)
Срезы клеток окрашивают кислым
фуксином
Избыток красителя удаляют, ополаскивая в спиртовом растворе пикриновой кислоты
Цитоплазма окрашивается
в желтый цвет, а митохондрии в ярко-розовый
Слайд 10Митохондрии в клетках печени. ТЭМ.
внешняя мембрана
внутренняя мембрана
отложения солей кальция и
магния
пластин-чатые кристы
гранулярный ЭПР
Слайд 11Наружная мембрана – много поринов, проницаема для сахаров, пиридонуклеотидов, небольших
белков, электролитов
Внутренняя мембрана – образует складки (кристы), непроницаема для ионов
и заряженных молекул, высокое содержание кардиолипинов
Белки, осуществляющие окислительное фосфорилирование
АТФ-синтазы
Транспортные белки
Слайд 13Авторепродукция митохондрий
Кольцевые молекулы ДНК (от 1 до 50 на мтх),
размер 16-19 т.п.н.
Мтх ДНК человека кодирует 2 рРНК, 22 тРНК,
13 белков (т.е. 37 генов)
Генетический код в МХ видоизменен, и значения 4 из 64 кодонов отличные от значений этих кодонов в других геномах. Например, триплет UGA, служащий в универсальном коде стоп-кодоном, в МХ кодирует триптофан.
Слайд 14Транслокаторы белков митохондриальных белков
Слайд 15Встраивание белков во внешнюю мембрану митохондрий
Слайд 16Встраивание белков во внутреннюю мембрану митохондрий
Слайд 17Схема энергетического метаболизма митохондрии
Слайд 18Электрон-транспортная цепь митохондрий
Слайд 19Электрон-транспортная цепь митохондрий
Слайд 20Грибовидные тельца.
Негативное контрастирование, мтх разрушены ультразвуком
Слайд 23Митохондрии в мышце.
саркомер
митохондрии
Слайд 24Митохондриальный ретикулум. ТЭМ.
Слайд 25Митохондриальный ретикулум в поперечнополосатой скелетной мышце
Слайд 26Митохондриальный ретикулум в поперечнополосатой скелетной мышце
Слайд 27Митохондриальная система кардиомиоцитов
Слайд 28 Гликоген в клетках печени. ТЭМ.
Слайд 30Жир в клетках печени аксолотля. ТЭМ.
липидные капли
Слайд 31Пигментные клетки в коже головастика
Слайд 32Меланофор. ТЭМ
гранулы меланина
ядро
цитоплазма
митохондрии
Слайд 33Рисунки
СМ фото Окрашивание митохондрий флуоресцентным красителем Родамином 123 в клетках
культуры
СМ СДГ в клетках культуры СПЭВ
ЭМ Продольный срез митохондрии в
клетках поджелудочной железы летучей мыши
ЭМ Грибовидные тельца
ЭМ Митохондрии в сердечной мышце. А. Ортодоксальная митохондрия. Б. Набухшая митохондрия
ЭМ Митохондриальный ретикулум в скелетной мышце: поперечный и продольный срез
СМ Пигментные клетки
ЭМ Пигментные клетки
СМ Жир в клетках печени
ЭМ Жир в клетках печени
СМ Митохондрии по Альтману