Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Аффинная хроматография
Содержание
- 1. Аффинная хроматография
- 2. ЛИТЕРАТУРАТуркова Я.. Аффинная хроматография, пер. с англ.. М.,
- 3. Аффинная хроматография (от латинского affinis - родственный)
- 4. ЛИГАНДЫ - соединения, ковалентно связанные с матрицей,
- 5. Примеры биоспецифического взаимодействия1. фермент – ингибитор2. фермент
- 6. Этапы аффинной хроматографии
- 7. Элюирующие растворы1. Буферные растворы со значением рН
- 8. 6. Буферные растворы с добавлением детергентов;7. Буферные
- 9. Виды аффинной хроматографии1. Аффинная хроматография с использованием
- 10. Лиганды с индивидуальной специфичностью1. моноклональные и поликлональные
- 11. Лиганды с групповой специфичностью1. лектины (конканавалин А,
- 12. 5. триазиновые красители;6. гепарин;7. ингибиторы протеаз;8. консервативные области ДНК (например, промоторы);9. желатин;10. хелатирующие агенты
- 13. Хелатирующий агент (chelating agent) (от греческого chele — клешня) - -
- 14. Одним из наиболее перспективных направлений развития аффинной
- 15. Фенилбороновая кислотаФенилбороновая кислота обладает способностью избирательно связывать
- 16. Этапы проведения аффинной хроматографии1. Подготовка и промывка колонки
- 17. Аффинная сорбцияСпецифическое связывание взаимодействующего с лигандом соединения. Отмыв несвязанных соединений.
- 18. Элюция – разрыв биоспецифических связейДля элюции применяется
- 19. Затем элюат нейтрализуетсяНа завершающем этапе определяется специфическая
- 20. 1. Примеры биоаффинных взаимодействий2. Виды аффинной хроматографии;3. Металлоаффинная хроматография;4. Свойства идеального носителя (матрицы) для аффинной хроматографии;
- 21. 5. Матрицы углеводной природы. Структура. Достоинства и
- 22. Скачать презентанцию
ЛИТЕРАТУРАТуркова Я.. Аффинная хроматография, пер. с англ.. М., 1980 http://booksshare.net/index.php?id1=4&category=biol&author=tukova-ya&book=1980;П.Дин, У. Джонсон Аффинная хроматография. Методы. МИР:1988Л.А. Остерман Хроматография белков и нуклеиновых кислот, 1985. 536 С http://booksonchemistry.com/index.php?id1=3&category=hromatografia&author=osterman-la&book=1985&page=215.
Слайды и текст этой презентации
Слайд 2ЛИТЕРАТУРА
Туркова Я.. Аффинная хроматография, пер. с англ.. М., 1980 http://booksshare.net/index.php?id1=4&category=biol&author=tukova-ya&book=1980;
П.Дин, У.
Джонсон Аффинная хроматография. Методы. МИР:1988
кислот, 1985. 536 С http://booksonchemistry.com/index.php?id1=3&category=hromatografia&author=osterman-la&book=1985&page=215.
Слайд 3Аффинная хроматография (от латинского affinis - родственный) (биоспецифическая хроматография, хроматография
по сродству)
- это метод очистки и разделения белков, основанный
на их избирательном взаимодействии с лигандом, ковалентно связанным с инертным нерастворимым носителем (матрицей аффинного сорбента) 
Слайд 4ЛИГАНДЫ -
соединения, ковалентно связанные с матрицей, биоспецифически (комплементарно) взаимодействующие
с выделяемыми соединениями.
Биоспецифическое взаимодействие основано на стерическом соотвествии взаимодействующих веществ
и связано с выполнением биологической функции лиганда и выделяемого соединения.
Слайд 5Примеры биоспецифического взаимодействия
1. фермент – ингибитор
2. фермент – субстрат
3. фермент
– активатор
4. антиген – антитело
5. комплементарные нуклеиновые кислоты
6. гормон- клеточный
рецептор7. нейромедиатор – рецептор
8. убиквитин – протеасома
9. фибронектин – коллаген
Слайд 7Элюирующие растворы
1. Буферные растворы со значением рН 2,4-2,8
2. Буферные растворы
со значением рН > 10
3. Буферные растворы с высокой ионной
силой;4. Буферные растворы с повышенной температурой (< 56 градусов Цельсия);
5. Буферные растворы с добавлением органических растворителей;
Слайд 86. Буферные растворы с добавлением детергентов;
7. Буферные растворы с добавлением
хаотропных соединений (роданид калия или натрия);
8. Буферные растворы с добавлением
денатурирующих агентов ( мочевина разрушает водородные связи); 
Слайд 9Виды аффинной хроматографии
1. Аффинная хроматография с использованием лиганда индивидуальной специфичности.
2.
Аффинная хроматография с использованием лиганда групповой специфичности
Слайд 10Лиганды с индивидуальной специфичностью
1. моноклональные и поликлональные антитела к данному
антигену;
2. гаптены;
3. субстрат фермента
4. специфический ингибитор фермента
5. специфический активатор фермента
6.
комплементарная ДНК или РНК
Слайд 11Лиганды с групповой специфичностью
1. лектины (конканавалин А, специфически связывающий молекулы,
содержащие -D-маннопиранозил, -D-глюкопиранозил; лектин из зародышей пшеницы, специфически связывающий N-ацетилглюкозамин);
2. сахара;
3. коферменты (НАД+, НАДФ+, коферментом-А);
4. иммобилизованные нуклеозидфосфаты;
Слайд 125. триазиновые красители;
6. гепарин;
7. ингибиторы протеаз;
8. консервативные области ДНК (например,
промоторы);
9. желатин;
10. хелатирующие агенты
Слайд 13Хелатирующий агент (chelating agent) (от греческого chele — клешня) -
- лиганды, обладающие способностью
связывать атомы металлов.
Содержат химические группы, содержащие подвижный протон (например -COOH,
-ОН, -SO3H); Примером хелатирующих агентов служит этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА), которая прочно и обратимо связывает двухвалентные катионы
Слайд 14Одним из наиболее перспективных направлений развития аффинной хроматографии оказалось использование
ее металохелатного варианта.
В рекомбинантные белки вводится поли - гистидиновая
аффинная метка, способная связываться с катионами никеля и других металлов.Полученный методом генной инженерии белок выделяется методом метало - аффинной хроматографии. За 1 цикл достигается 95% очистка.
Слайд 15Фенилбороновая кислота
Фенилбороновая кислота обладает способностью избирательно связывать молекулы, содержащие цис-диольную
группировку, в том числе, такие как углеводы и гликопротеиды. Образующиеся
ковалентные связи легко расщепляются в слабокислой среде, а также под действием конкурирующих диолов, таких как этиленгликоль, сорбитол и так далее.
Слайд 17Аффинная сорбция
Специфическое связывание взаимодействующего с лигандом соединения.
Отмыв несвязанных соединений.
Слайд 18Элюция – разрыв биоспецифических связей
Для элюции применяется буферный раствор с
крайними значениями рН, или со специфическими реагентами
Слайд 19Затем элюат нейтрализуется
На завершающем этапе определяется специфическая активность выделенного соединения
и его удельная активность в расчете на мг белка.
Например:
Слайд 201. Примеры биоаффинных взаимодействий
2. Виды аффинной хроматографии;
3. Металлоаффинная хроматография;
4. Свойства
идеального носителя (матрицы) для аффинной хроматографии;
Слайд 215. Матрицы углеводной природы. Структура. Достоинства и недостатки.
6. Полимерные синтетические
носители для аффинной хроматографии. Структура. Достоинства и недостатки.
7. Применение макропористых
стекол и силикагеля для синтеза аффинных сорбентов. Структура частиц, методы получения.8. Этапы аффинной хроматографии (сорбция, промывка, элюция, нейтрализация, определение удельной активности)
