Слайд 2БАКТЕРИОФАГИ
«пожирающий бактерии» (от бактерия + греч. phagos – пожирающий)
вирусы бактерий,
специфически проникающие в бактериальные клетки и поражающие их.
Для обозначения используют:
название
м/о, из которых они выделены: колифаги, стафилофаги,
буквы латинского алфавита
Слайд 3БАКТЕРИОФАГ
Определение: - вирус, поражающий прокариотическую клетку,
Структура: НК (ДНК или РНК)+
белок
Слайд 5Строение бактериофагов
икосаэдрическая головка,
хвостовой отросток: внутри – полый цилиндрический стержень, сообщающийся
с головкой, а снаружи - чехол отростка, заканчивающийся шестиугольной базальной
пластинкой с шипами, от которых отходят фибриллы (нити),
капсид головки и чехол хвостового отростка бактериофага состоят из полипептидных субъединиц, уложенных по икосаэдрическому (головка) или спиральному (отросток) типу симметрии.
Слайд 6Строение классического бактериофага
Слайд 8Нуклеиновая кислота фага
Бактериофаги (фаги) содержат ДНК или РНК:
- двунитевые
-
однонитевые
линейные,
-кольцевые.
Большинство – двунитевую ДНК, замкнутую в кольцо
Слайд 9
В состав головки входит:
полипептид, состоящий из аспарагиновой, глутаминовой кислот и
лизина,
- у некоторых – гистоноподобный белок → суперспирализация ДНК.
Слайд 10
В состав сокращающегося чехла входит:
у некоторых фагов входит АТФ
и ионы кальция.
В дистальной части отростка – лизоцим.
Слайд 11Морфологические типы бактериофагов
I тип (нитчатые)
без головки (только отросток)
II тип
без отростка
(только головка)
III тип
головка и отросток, короткий без чехла
IV тип
головка и
отросток, длинный с чехлом, не сокращающийся
V тип
головка и отросток, длинный с чехлом, сокращающийся
Слайд 13Классификация бактериофагов по спектру действия
полифаги
поражают несколько видов
монофаги (видовые)
поражают один вид
типовые
фаги
поражают часть вида (фаговар)
Слайд 14Классификация фагов в зависимости от эффекта действия на бактериальную клетку
Вирулентные
умеренные
Слайд 15Взаимодействие вирулентного фага с бактериальной клеткой
адсорбция фага на специальных рецепторах
КС
(на протопластах не происходит)
проникновение НК
(депротеинизация)
репликация фаговой НК и синтез
фаговых белков
сборка фаговых частиц
выход зрелых фагов
лизис бактерии бактерия не погибает
(«взрыв») (некоторые нитчатые фаги)
ПРОДУКТИВНАЯ ИНФЕКЦИЯ
Слайд 16Взаимодействие умеренного фага с бактериальной клеткой
адсорбция фага на специальных рецепторах
КС
(на протопластах не происходит)
проникновение НК
(депротеинизация)
интеграция фаговой НК в геном
бактерии
профаг
(фаговый репрессор блокирует транскрипцию)
лизогенная культура
Л И З О Г Е Н И З А Ц И Я
в дальнейшем – может индукция профага
продуктивная инфекция
Слайд 17Практическое применение бактериофагов
Фагодиагностика
Выявление определённого вида бактерий в патологическом материале
реакция нарастания
титра фага
Идентификация чистой культуры
определение вида
фагоиндикация
определение фаговара
фаготипирование
Слайд 18Практическое применение бактериофагов
● Фаготерапия
Фаг применяется местно
●Фагопрофилактика
брюшной тиф
дизентерия
Слайд 19Выделение бактериофага
Материал:
объект внешней среды
бактериальная культура
бактериальный фильтр
фильтрат
МПБ + чувствительная бактерия
инкубация
роста нет
– фаг присутствует (очищают фильтрованием)
рост есть – фаг отсутствует
Слайд 20
Определение активности бактериофагов = фагоиндикация
Качественный метод:
метод «стерильной дорожки»
Количественные методы:
А) Метод
Грациа
Б) Метод Аппельмана
Слайд 21Метод фагоиндикации «стекающая капля» = «стерильная дорожка»
стекающая капля по газону
засеянной культуры
регистрация роста бактерий в месте стекания капли
рост есть –
-
роста нет – +
Слайд 22
Определение активности бактериофагов = фагоиндикация
Количественные методы:
А) Метод Грациа: готовят десятикратные
разведения фага в хлориде натрия от 10-2 до 10-7
Затем
по 0,5 мл из каждого разведения смешивают с таким же объемом бульонной культуры и 4 мл расплавленного и остуженного до 45 град. агара и выливают на чашки Петри.
Когда агар застынет чашки помещают в термостат при 37 градусах на 24 часа и затем учитывают результаты:
-одна фаговая частица образует одно «стерильное пятно»
- Величина, показывающая концентрацию фага называется титром.
Слайд 23Титрование фага по Грациа
МПА + разведение фагосодержащего материала + чувствительная
культура
МПА (подложка)
чашка Петри со средой (в разрезе)
Слайд 25
Определение активности бактериофагов = фагоиндикация
Количественные методы:
Б) Метод Аппельмана: готовят десятикратные
разведения фага в питательном бульоне от 10-2 до 10-8.
Затем
в каждую пробирку добавляют по 0,2мл бульонной культуры и ряды ставят в термостат.
После инкубации в термостате учитывают результаты:
=в положительном случае наблюдается просветление среды.
Разведение в последней пробирке, где произошел полный лизис культуры, называется титром.
Слайд 27Фаготипирование бактерий
засев газоном на пластинчатый агар изучаемого штамма
нанесение капель типовых
фагов
инкубация
регистрация «стерильных пятен» («бляшек»)
фаготип (фаговар) = перечень типовых фагов, лизирующих
данный вариант
Слайд 28
Определение спектра литического действия фага
Чашку делят на квадратики и на
каждый газоном засевают испытуемые штаммы,
затем на каждый квадратик петлей
или пипеткой наносят каплю фага
после инкубации в термостате в течение 24 час определяют наличие «стерильных пятен».
Количество культур, которые лизирует бактериофаг – спектр его действия.
