Разделы презентаций


днк-диагностика

Содержание

ДНК – технологии ДНК – технологии используются в медицине для диагностики и лечения различных заболеваний, в т.ч. наследственных, создания лекарственных препаратов, создания генетического материала, идентификации личности.

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1Биологическая Химия

МЕТОДЫ ДНК - ДИАГНОСТИКИ

Биологическая ХимияМЕТОДЫ  ДНК - ДИАГНОСТИКИ

Слайд 2ДНК – технологии
ДНК – технологии используются в медицине для

диагностики и лечения различных заболеваний, в т.ч. наследственных, создания лекарственных

препаратов, создания генетического материала, идентификации личности.

ДНК – технологии ДНК – технологии используются в медицине для диагностики и лечения различных заболеваний, в т.ч.

Слайд 3 


Выделения ДНК (Получение нативной ДНК).

1. быстрый

лизис клеток,
2. удаление органелл,
3. разрушение белков специфическими протеазами,


4. ДНК экстрагируется из растворов
5. ДНК растворяется в буферном растворе.
6. ДНК фрагментируется.
 Выделения ДНК   (Получение нативной ДНК). 	1. быстрый лизис клеток, 2. удаление органелл, 3. разрушение белков

Слайд 47. определение взаимного расположения фрагментов ДНК и локализации в хромосомах.



8. определение первичной структуры ДНК.

7. определение взаимного расположения фрагментов ДНК и локализации в хромосомах. 8.  определение первичной структуры ДНК.

Слайд 5 Специфические рестриктазы –
(ферменты разрушающие ДНК) –
рестрикционные эндонуклеазы
бактериальных

клеток.

Специфические рестриктазы – (ферменты разрушающие ДНК) – рестрикционные эндонуклеазы бактериальных клеток.

Слайд 6Рестриктазы
узнают специфические последовательности состоящие из 4 – 6 или реже

из 8 – 12 нуклеотидов в 2- х цепочечной молекуле

ДНК и разрезают её в местах локализации этих последовательностей.

Рестриктазыузнают специфические последовательности состоящие из 4 – 6 или реже из 8 – 12 нуклеотидов в 2-

Слайд 7C

T

T

A

A

G

G

T

C

G

A

A

T

T

G

A

C

C



5’

3’

3’ 5’


Действие рестриктаз 1 –го типа, образование слепых концов

CTTAAGGTCGAATTGACC

Слайд 8Действие рестриктаз 2 – го типа, образование липких концов
C

T

T

A

A

G

G

T

C

G

A

A

T

T

G

A

C

C


 

5’

3’

3’ 5’


Действие рестриктаз 2 – го типа, образование липких концовCTTAAGGTCGAATTGACC

Слайд 9 ДНК – идентификация специфических последовательностей.

Идентификация осуществляется путём гибридизации с

меченными ДНК - зондами.
ДНК – зонд используется

для специфического связывания исследуемых участков генов.
ДНК – идентификация специфических последовательностей.  	Идентификация осуществляется путём гибридизации с меченными ДНК - зондами.  	ДНК

Слайд 10ДНК – зонд (ДНК – чип)

фрагменты однонитевой ДНК длиной

от 15- 20 до 100 и выше 100 нуклеотидных звеньев

со строго определённой первичной структурой.
ДНК – зонд (ДНК – чип) фрагменты однонитевой ДНК длиной от 15- 20 до 100 и выше

Слайд 11Метод гибридизации по Саузерену –


используется для визуализации фрагментов ДНК.






Метод гибридизации по Саузерену – используется для визуализации фрагментов ДНК.

Слайд 12
Методики Нозерн – блоттинга и Вестерн – блоттинга для визуализации

соответственно РНК и белков.

Методики Нозерн – блоттинга и Вестерн – блоттинга для визуализации соответственно РНК и белков.

Слайд 13Метод блотт – гибридизации:
Полученные в ходе

рестриктазных реакций фрагменты ДНК подвергаются денатурации и перносятся на плотный

носитель чаще всего на нитроцеллюлозный фильтр.
(Процесс переноса - блоттинг).

Блоттинг за счёт капиллярных сил, электрического поля или вакуума.


Метод блотт – гибридизации:    Полученные в ходе рестриктазных реакций фрагменты ДНК подвергаются денатурации и

Слайд 14
Гибридизация с ДНК или РНК – зондом, содержащим метку.

Определение

положения искомого участка ДНК.

Гибридизация с ДНК или РНК – зондом, содержащим метку. Определение положения искомого участка ДНК.

Слайд 15
Серповидно – клеточная анемия.
Миссенс – мутация связана с заменой

в гене В – цепи гемоглобина триплета ГАГ на ГТГ,

при этом в ходе трансляции вместо остатка глутаминовой кислоты в 6 - м положении В – цепи встраивается валин (B6 Глу Вал).

Серповидно – клеточная анемия.  Миссенс – мутация связана с заменой в гене В – цепи гемоглобина

Слайд 16 









1,3 килобазы
 
 
 
 
1,1 килобазы
 
 
 
 


 
 
 
 
 
 
 
Пример радиоавтограммы после гибридизации
с зондом к В

– глобину

АА

AS SS
 
 1,3 килобазы    1,1 килобазы           Пример радиоавтограммы после гибридизации с зондом к В – глобинуАА

Слайд 17Секвенирование
Установление первичной структуры ДНК

Методы секвенирования:
Химические
- Ферментативные

СеквенированиеУстановление первичной структуры ДНКМетоды секвенирования:Химические- Ферментативные

Слайд 18  Методика дидезоксисеквенирования: реакционные пробы ставятся в 4- х кюветах

и в каждую добавляется следующие компоненты:

1. денатурированная однонитевая ДНК;
2. ДНК

– полимераза;
3. дНТФ: дАТФ, дЦТФ, дГТФ, дТТФ;
+
1     Один из терминаторов - дидезоксинуклеозидтрифосфат: ддАТФ, ддЦТФ, ддГТФ, ддТТФ
.
 	 Методика дидезоксисеквенирования: реакционные пробы ставятся в 4- х кюветах и в каждую добавляется следующие компоненты:1. денатурированная

Слайд 19Дидезоксисеквенирование
Дидезоксисеквенирование

ДидезоксисеквенированиеДидезоксисеквенирование

Слайд 20 Получение рекомбинантных ДНК и их

амплификация.
1. фрагментирование 2- х молекул ДНК, полученных

из разных источников с образованием липких концов.

2. процедура – отжига, что приводит к образованию рекомбинантов, соединённых за счёт липких концов

3.сшивка липких концов ДНК – лигазой – с образованием рекомбинантной ДНК.

Получение рекомбинантных ДНК и их амплификация. 	  	1. фрагментирование 2- х

Слайд 21Клонирование ДНК.
Клон – это популяция идентичных молекул.

Клонирование -

встраивание нужного нам фрагмента ДНК в векторную молекулу ДНК (вектор).


Вектор обеспечивает проникновение ДНК в бактериальные клетки, плазмиды, фаги, ретро – и аденовирусы.

При размножении трансформированных бактерий происходит увеличение числа копий введённого в плазмиду фрагмента ДНК.

Клонирование ДНК. 	Клон – это популяция идентичных молекул. 	Клонирование - встраивание нужного нам фрагмента ДНК в векторную

Слайд 23
Геномная библиотека - содержит все гены данного генома

готовится из

тотальной ДНК клеточной линии или ткани.

Для конструирования геномной библиотеки

используются фаговые векторы, т.к. они позволяют клонировать протяжённые фрагменты ДНК.
 

Геномная библиотека - содержит все гены данного генома готовится из тотальной ДНК клеточной линии или ткани. 	Для

Слайд 24"Геном человека" ("Human Genome Project") .

Основной задачей программы является построение

исчерпывающих генетическихОсновной задачей программы является построение исчерпывающих генетических и физических

карт большого разрешения каждой из 24 хромосом человека и определение полной первичной структуры ДНК этих хромосом.



Слайд 25 Генетические карты сцепления - одномерные схемы взаимного расположения генетических маркеров

на индивидуальных хромосомах.

Генетические карты сцепления правильно отражают порядок расположения

генетических маркеров на хромосомах,

Единицей измерения расстояний при генетическом картировании является один сантиморган (сМ), т.е. такое расстояние, при котором вероятность рекомбинации между генами равно 1%.

Генетические карты сцепления - одномерные схемы взаимного расположения генетических маркеров на индивидуальных хромосомах. 		Генетические карты сцепления правильно

Слайд 26 Физические карты генома отражают реальное расстояние между маркерами, выражаемое в

парах оснований.

Физические карты генома отражают реальное расстояние между маркерами, выражаемое в парах оснований.

Слайд 27Полимеразная цепная реакция (ПЦР).
Этот метод позволяет подвергать специфической амплификации in

vitro участки ДНК длиной от нескольких десятков до нескольких сотен

пар нуклеотидов, используя в качестве матрицы любые образцы ДНК.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР).Этот метод позволяет подвергать специфической амплификации in vitro участки ДНК длиной от нескольких десятков

Слайд 28Объекты исследования ПЦР
Материалы из тканей,

содержащие антигены различных инфекционных возбудителей (например: вирусные гепатиты, ИППП: герпес,,

трихомониоз, хламидиоз и др.).

Выявление онкомаркёров,


Объекты исследования      ПЦРМатериалы из тканей, содержащие антигены различных инфекционных возбудителей (например: вирусные

Слайд 29
Контроль качества лечения – пример хронизация процесса или латентное носительство,.



ПЦР используется для выявления наследственной патологии, идентификации личности, установления отцовства,

картирования генома.
Контроль качества лечения – пример хронизация процесса или латентное носительство,. ПЦР используется для выявления наследственной патологии, идентификации

Слайд 30ПЦР проводится в специальных приборах, которые называются амплификаторы ДНК.

Обычно

с исследуемым образцом запускается 25 – 30 циклов ПЦР, в

ходе которых число синтезированных копий ДНК достигает несколько миллионов.

ПЦР проводится в специальных приборах, которые называются амплификаторы ДНК. 	Обычно с исследуемым образцом запускается 25 – 30

Слайд 31 Участок исследуемой ДНК гибридизуют с 2 – мя искусствено синтезированными

праймерами – олигодезоксирибонуклеотидными последовательностями длиной от 15 до 30 пар

нуклеотидов, которые будут комплементарны 3’ – концам пар нуклеотидов.

ПЦР протекает в буферном растворе, содержащим ионы магния.

Участок исследуемой ДНК гибридизуют с 2 – мя искусствено синтезированными праймерами – олигодезоксирибонуклеотидными последовательностями длиной от 15

Слайд 32 Один цикл ПЦР включает 3 этапа:


1.    Плавление
2.     Гибридизация ДНК с праймерами
3.    

Элонгация термостабильной ДНК - полимеразой

Один цикл ПЦР включает 3 этапа: 1.       Плавление2.   	 Гибридизация ДНК

Слайд 33
ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ


ЦЕПЬ 1 3’

ЦЕПЬ 2 5’
ЦИКЛ 1

НАГРЕВАНИЕ, ОТЖИГ
ЦЕПЬ 1 3’
ПРАЙМЕР
ПРАЙМЕР
ЦЕПЬ 2 5’

ЭЛОНГАЦИЯ ЦЕПЕЙ

ЦЕПЬ 1 3’
  5 ’
  5’


 
 


 
ЦЕПЬ 2 5’
 










ЦЕПЬ 1 3’


5’
5’





ЦЕПЬ 2 5’






























УЧАСТОК ДНК

УЧАСТОК ДНК

















ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯЦЕПЬ 1 3’ЦЕПЬ 2  5’ ЦИКЛ 1

Слайд 34ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ
ЦИКЛ 2
ЦЕПЬ 1 3’
 
 
 
 
  ЦЕПЬ 2 5’
 
 

ЦЕПЬ 1 3’
 
 
 
 
  ЦЕПЬ 2 5’

 
 
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
ЦЕПЬ 2

5’
 
 
 
 
 
 
 
 
 






































ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯЦИКЛ 2ЦЕПЬ 1 3’      ЦЕПЬ 2  5’   ЦЕПЬ 1 3’       ЦЕПЬ 2

Слайд 35 Специальная программа

Genotyper-tm

позволяет автоматически соотносить

информацию о интенсивности флюоресценции продуктов PCR с имеющейся информацией об изученных локусах.

Метод ПЦР позволяет создавать гибридные карты генома

Специальная программа        Genotyper-tm  позволяет автоматически

Слайд 36 ПДРФ – Полиморфизм длин

рестрикционных фрагментов.

∙        гемофилия А, талассемия, ретинобластома и гранулематоз

∙        контроль проявленности

генов у потомства гетерозиготных родителей по различным генам, например по гену серповидно – клеточной анемии и др. нарушений.

∙        Идентификация делеции в гене белка дистрофина (миодистрофия Дюшена)

ПДРФ – Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов.∙        гемофилия А, талассемия, ретинобластома и

Слайд 37 Принцип метода основан на
изменении деятельности известных

рестриктаз.


Принцип метода основан на изменении деятельности известных рестриктаз.

Слайд 38 ПДРФ - анализ проводится в три

этапа:

1    1. Выделение геномной ДНК

    2. Рестрикция геномной ДНК специфической

рестриктазой

    3. Электрофоретическое разделение образующихся фрагментов с последующей идентификацией путём блотт – гибридизации по Саузерну.

ПДРФ - анализ проводится в три этапа:1    1. Выделение геномной ДНК    2. Рестрикция

Слайд 39


1.     Отсутствие рестрикции

фрагмента ДНК с образованием более крупного фрагмента



1.     Отсутствие рестрикции фрагмента ДНК с образованием более крупного фрагмента

Слайд 40
2.     При наличии рестрикции в полиморфном участке на электрофореграмме будет

присутствовать фрагмент равный расстоянию между полиморфным участком рестрикции и одним

из ближайших постоянных участков рестрикции.

2.     При наличии рестрикции в полиморфном участке на электрофореграмме будет присутствовать фрагмент равный расстоянию между полиморфным участком

Слайд 41Генная терапия.
Заболевания вызванные функциональной недостаточностью продукта того или иного гена,

можно лечить путём заместительной терапии.

Принцип метода заключается в клонировании гена

в векторе, способном включится в геном клетки – хозяина.
Ген переносится в соматические клетки и потомкам не передаётся.

Генная терапия.	Заболевания вызванные функциональной недостаточностью продукта того или иного гена, можно лечить путём заместительной терапии.	Принцип метода заключается

Слайд 42
Внедрение гена в половые клетки животных приводит к появлению трансгенных

животных, на которых исследуют экспрессию конкретных генов.

Внедрение гена в половые клетки животных приводит к появлению трансгенных животных, на которых исследуют экспрессию конкретных генов.

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика