Разделы презентаций


ЭЛЕКТРОФОРЕЗ презентация, доклад

Содержание

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ – движение заряженных молекул в растворе (токопроводящей среде) под действием сил постоянного электрического поляМетод был предложен Тизелиусом для разделения заряженных молекул (1925г.).В 1948 году Тизелиус получил Нобелев-скую премию за разработку

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1 ЭЛЕКТРОФОРЕЗ (аналитический)

ЭЛЕКТРОФОРЕЗ (аналитический)

Слайд 2ЭЛЕКТРОФОРЕЗ – движение заряженных молекул в растворе (токопроводящей среде) под

действием сил постоянного электрического поля
Метод был предложен Тизелиусом для разделения

заряженных молекул (1925г.).

В 1948 году Тизелиус получил Нобелев-скую премию за разработку методов электрофоретического разделения белков.
ЭЛЕКТРОФОРЕЗ – движение заряженных молекул в растворе (токопроводящей среде) под действием сил постоянного электрического поляМетод был предложен

Слайд 3Большинство биомолекул содержат ионизирующиеся функциональные группы, которые при определенных значениях

рН обеспечивают молекуле свойства катиона или аниона.
Два

важнейших фактора, определяющих эффектив-ность разделения заряженных молекул при электро-форезе:
Отношение эл. заряда молекулы к её массе:
q / m
Молекулы с близкими по величине q, но отличающие-
ся по молекулярной массе.

2. Взаимодействие материала носителя с молекула-
ми разделяемой смеси («эффект молекулярного
сита»).
Большинство биомолекул содержат ионизирующиеся функциональные группы, которые при определенных значениях рН обеспечивают молекуле свойства катиона или аниона.

Слайд 4 Различия в скоростях движения заряженных молекул смеси будет определяться: - усиливает

движение: движущая сила электрического поля,

действующая на катионы и анионы - замедляют движение: сила трения и силы электростатического взаимодействия молекулы с материалом носителя.

E x q
V движения =
D x η x F
где: E – напряженность электрического поля
q – заряд молекулы (знак и величина)
D – размер (форма) молекулы (сила трения)
η - вязкость среды
F – силы электростатического взаимодействия
молекулы и материала носителя

Различия в скоростях движения заряженных молекул смеси будет определяться: - усиливает движение: движущая сила электрического

Слайд 5Материалы носителя для электрофореза
Хроматографическая бумага
Ацетат целлюлозы
Тонкие слои оксидов Si и

Al
Гели:
- агар

- крахмал
- полиакриламид (ПААГ):

В зависимости от %-концентрации акриламида
(3 – 30%) формируется сеть с заданным разме-
ром ячеек. Это позволяет достигать высокую
эффективность разделения исходной смеси.
Материалы носителя для электрофорезаХроматографическая бумагаАцетат целлюлозыТонкие слои оксидов Si и AlГели:

Слайд 6



Стабилизированный
источник
постоянного тока

катод
анод
Общая схема электрофоретической установки
Катодная и анодная
камеры, заполненные
буфером
старт
Обычно U

= 100-500 В
Носитель расположен горизонтально

Стабилизированныйисточник постоянного токакатоданодОбщая схема электрофоретической установкиКатодная и аноднаякамеры, заполненныебуферомстартОбычно U = 100-500 ВНоситель расположен горизонтально

Слайд 7Буферы для электрофореза:
фосфатный буфер
веронал-мединаловый буфер
трис-HCl буфер
трис-глициновый

буфер
ацетатный буфер
боратный буфер
Буферы обеспечивают:
создают необходимое значение

рН, при котором происхо-
дит диссоциация определенных функциональных групп
в разделяемых молекулах (регуляция величины q)
- на поверхности катода и анода происходит электролиз:
на катоде – защелачивание, на аноде – закисление. Это
требует высокой концентрации компонентов буфера:
100 mМ и более. После первого использования буфера,
его порции из катодной и анодной камер уже не смеши-
вают.
Буферы для электрофореза: фосфатный буфер веронал-мединаловый буфер трис-HCl буфер трис-глициновый буфер ацетатный буфер боратный буфер Буферы обеспечивают:

Слайд 8Виды электрофореза
Аналитический Э/Ф:
- качественный анализ

- количественный анализ
- оценка чистоты препаратов

- определение молекулярной массы
Препаративный Э/Ф:
уступает по возможностям хромато-
графическим методам
Виды электрофорезаАналитический Э/Ф:   - качественный анализ   - количественный анализ   - оценка

Слайд 9Диск-электрофорез (Дэвис, 1959)
Связан с изобретением полиакриламидного геля.
Термин происходит от англ.

discontinuous = преры-
вистый, неоднородный.
Формируется гель, в минимальном варианте состоя-
щий из

двух слоёв: концентрирующий гель и разде-
ляющий (рабочий) гель (разная %-концентрация
акриламида). В концентрирующий гель (низкая кон-
центрация, крупнопористый) вносят разделяемую
смесь. Это позволяет смеси войти в разделяющий
гель в виде компактной порции, что важно для после-
дующего эффективного разделения компонентов.
Собственно процесс разделения идет в толще раз-
деляющего геля (может состоять из 1 и более слоев
с определенной концентрацией акриламида).
Диск-электрофорез (Дэвис, 1959)Связан с изобретением полиакриламидного геля.Термин происходит от англ. discontinuous = преры-вистый, неоднородный.Формируется гель, в минимальном

Слайд 10Исходные компоненты для приготовления ПААГ гото-
вят в виде отдельных растворов.

В состав включают
буфер для придания электропроводных свойств
будущему гелю.



Растворы смешивают непосредственно перед исполь-
зованием и сразу заливают в соответствующие фор-
мы (пластины или цилиндры), где и происходит поли-
меризация геля.

Каждый слой разделяющего геля формируется после-
довательно. Завершается процесс полимеризацией
концентрирующего геля (процесс идет снизу вверх).
В этом геле заранее, на линии старта, формируют ячей-
ки (углубления), куда будут вносить разделяемую
смесь.
Исходные компоненты для приготовления ПААГ гото-вят в виде отдельных растворов. В состав включают буфер для придания электропроводных

Слайд 11Общая схема установки для диск-электрофореза
Источник
тока







+
Катодная камера
Анодная камера
Стеклянная
или
пластиковая
трубка
Слой концентрирующего


геля, 5% ПААГ
Слой
разделяющего
(рабочего)
геля, 7,5% ПААГ
Катодная и анодная
камеры залиты буфером
Трис-глицин, рН

9,5
Общая схема установки для диск-электрофорезаИсточниктока+Катодная камераАнодная камераСтеклянная илипластиковая трубкаСлой концентрирующего геля, 5% ПААГСлойразделяющего(рабочего)геля, 7,5% ПААГКатодная и аноднаякамеры

Слайд 12Преимущества диск-электрофореза в ПААГ:
Самая высокая разрешающая способность по сравнению


со всеми остальными носителями. Обусловлена возмо-
жностью варьировать %-концентрацию

акриламида и та-
ким образом целенаправленно формировать его разде-
ляющую способность.

Сравнительная простота и быстрота анализа.

Отсутствует электростатическое взаимодействие молекул
с нитями полиакриламида (важно для высокой разделяю-
щей способности геля).

Возможность проведения двумерного электрофоретичес-
кого разделения (двумерный электрофорез).
Преимущества диск-электрофореза в ПААГ: Самая высокая разрешающая способность по сравнению  со всеми остальными носителями. Обусловлена возмо-

Слайд 13Изоэлектрическое фокусирование
Используется для разделения смеси белков на градиенте рН.
Каждая

молекула смеси движется по носителю до тех пор, пока не

достигнет зоны, где рН соответ-ствует его изоэлектрической точке (рI), и останавли-вается в этой зоне – происходит фокусирование раз-
личных молекул смеси в разных зонах.

Процедуру проводят в клонках особой конструкции. Их заполняют синтетическими низкомолекулярными носителями (амфолиты) – их индивидуальные pI охватывают весь диапазон значений рН. Это позволяет сформировать градиент рН с любыми заданными крайними значениями.
Изоэлектрическое фокусированиеИспользуется для разделения смеси белков на градиенте рН. Каждая молекула смеси движется по носителю до тех

Слайд 14Компоненты смеси разделя-
ются в градиенте рН в соот-
ветствии с различиями

в рI.

Градиент рН возникает при
наложении электрического
поля на амфолиты.
Образец вносится

в виде
зоны, либо смешивается по
всей колонке.

Заряженные компоненты об-
разца мигрируют к противо-
положно заряженному элек-
троду. Когда величина рН
оказывается равной рI, дви-
жение компонента смеси
прекращается. В результате
образуются узкие зоны.

Компоненты смеси разделя-ются в градиенте рН в соот-ветствии с различиями в рI.Градиент рН возникает при наложении электрическогополя

Слайд 15Применение изоэлектрического фокусирования:
Чаще всего этот вид электрофореза используют для
разделения

в один прием смесей белков с очень
близкими физико-химическими свойствами:


Например: изоферментов (различия pI между
разными изоформами могут составлять всего
0,02 ед. рН).
Применение изоэлектрического фокусирования:Чаще всего этот вид электрофореза используют для разделения в один прием смесей белков с очень

Слайд 16Иммуноэлектрофорез
Метод сочетает в себе электрофорез и иммунодиф-
фузию.
Служит для качественного

и количественного анали-
за смесей различных антигенов.

Формируют пластину из 2% агарового

геля. В центре пластины – гнездо для внесения смеси антигенов; вдоль длинного края пластины формируют желобок для внесения антител.

2. В гнездо в центре пластины вносят смесь антигенов и проводят электрофорез. При этом часть антигенов идут к катоду, а часть - к аноду.
Продолжительность около 90 мин.
ИммуноэлектрофорезМетод сочетает в себе электрофорез и иммунодиф-фузию. Служит для качественного и количественного анали-за смесей различных антигенов.Формируют пластину

Слайд 173. В желобок, расположенный вдоль пластины геля,
вносят смесь

антител. Возможность обнаружить
определенные антигены в изучаемой смеси опре-

деляется составом смеси антител.
Происходит диффузия (16-24 час.) антител в толщу
геля, где они встречают (или не встречают) свои
антигены. Происходит реакция преципитации. Её
результат наблюдают визуально: образуются «дуги»
на месте взаимодействия (встречи) АГ+АТ. Каждый
из антигенов образует «дугу» независимо от других.




Изучаемая смесь АГ

Смесь АТ
известного
состава

«Дуги» -
место образо-
вания иммун-
ных комплек-
сов.

Число образовавшихся дуг = числу антигенов






3. В желобок, расположенный вдоль пластины геля,  вносят смесь антител. Возможность обнаружить  определенные антигены в

Слайд 18Идентификация дуги преципитации, относящейся к
определенному антигену
Полиспецифи-
ческая антисы-
воротка
Исследуемая смесь антигенов
Чистый

препарат искомого антигена
3. Простая суперпозиция дуг
преципитации показывает


ту из них, которая соответ-
ствует искомому антигену.

Электрофорез антигенов.
2. Внесение полиспецифической антисы-
вортки в центральную канавку и диф-
фузия.

Пластика геля из 1 % агарозы
или 2 % агара.

Идентификация дуги преципитации, относящейся к определенному антигенуПолиспецифи-ческая антисы-вороткаИсследуемая смесь антигеновЧистый препарат искомого антигена3. Простая суперпозиция дуг

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика