Изучение изменений длин теломер в клетках сперматогенного ряда человека

диагностики наследственных болезней НИИАГиР
им. Д.О.Отта
Санкт-Петербургский государственный университет
Биолого-почвенный факультет
Кафедра генетики

и биотехнологии

Петровская-Каминская Анастасия Васильевна

Утверждение темы выпускной
квалификационной работы

Санкт-Петербург
2016

Научный руководитель:
к.б.н., н.с. Пендина Анна Андреевна

с возрастом длина теломер в сперматозоидах человека увеличивается (Kimura M,

Cherkas LF, Kato BS, Demissie S, Hjelmborg JB, Brimacombe M, et al., 2008). Возможно, это связано с работой теломеразы в сперматогониях

разных возрастных групп с обструктивной и необструктивной азооспермиеей

необструктивной азооспермией;
Сопоставить длины теломер в сперматогониях пациентов разных возрастных групп;

Провести сравнительный анализ длины теломер сперматогониев и сперматоцитов I;
Сопоставить длины теломер сперматоцитов I с длинами теломер метафазных хромосом, унаследованных от отца в зиготе;
Проанализировать взаимосвязь между уровнем метилирования субтеломерных участков хромосом и длиной теломер в сперматогониях

мужчин с азооспермией.
Биоптаты яичка пациентов с:
Необструктивной азооспермиеей
Обструктивной азооспермиеей
Вазэктомиеей
В

анализ будут взяты более 12 биоптатов.

in situ гибридизация (FISH) с ДНК-зондами к теломерным и субтеломерным

районам хромосом;
Иммунофлуоресцентное окрашивание с помощью специфических антител к 5-метилцитозину;
Получение и анализ изображений с использованием флуоресцентного микроскопа и специализированного ПО Leica DM2500;
Измерение интенсивности флуоресценции с помощью программы ImageJ.

длины теломер (L) по формуле
L=T/S, где
T – интенсивность флуоресценции

зонда к теломерному участку хромосомы
S – интенсивность флуоресценции зонда к субтеломерному участку хромосомы

Измерение интенсивности флуоресценции зондов

Флуоресцентная гибридизация in situ
с использованием
зондов к теломерным и субтеломерным
участкам хромосом

ли длина теломер в сперматогониях человека с возрастом?
Влияет ли тип

азооспермии на длину теломер в сперматогониях?
Изменяется ли длина теломер хромосом, унаследованных от отца в зиготе по сравнению с таковой в сперматогониях?
Какова взаимосвязь между уровнем метилирования субтеломерных участков хромосом и длиной теломер в сперматогониях?

с помощью промоторов в субтеломерных районах, которые могут подвергаться репрессии

за счет метилирования.
Повышенное количество TERRA в клетках человека коррелирует с потерей теломер.

репликации, за счет
ферментативного превращения
5-метилцитозина в цитозин