Разделы презентаций
- Разное
- Английский язык
- Астрономия
- Алгебра
- Биология
- География
- Геометрия
- Детские презентации
- Информатика
- История
- Литература
- Математика
- Медицина
- Менеджмент
- Музыка
- МХК
- Немецкий язык
- ОБЖ
- Обществознание
- Окружающий мир
- Педагогика
- Русский язык
- Технология
- Физика
- Философия
- Химия
- Шаблоны, картинки для презентаций
- Экология
- Экономика
- Юриспруденция
Кафедра медицинских нанобиотехнологий МБФ Методика проточной цитометрии и
Содержание
- 1. Кафедра медицинских нанобиотехнологий МБФ Методика проточной цитометрии и
- 2. Флуоресценция
- 3. Спектры возбуждения и испускания флуоресценцииSpectra Viewer
- 4. Спектры возбуждения и испускания флуоресценцииSpectra Viewer
- 5. Спектры возбуждения и испускания флуоресценции
- 6. Спектры возбуждения и испускания флуоресценции
- 7. Спектры возбуждения и испускания флуоресценцииBD FLUORESCENCE SPECTRUM VIEWER A MULTICOLOR TOOL
- 8. Слайд 8
- 9. Клеточный сортер Beckman MoFLO XDPОсобенности прибора:Скорость анализа
- 10. Технические характеристики: Твердотельные лазеры с длинами волн
- 11. Клеточный сортер состоит из нескольких блоков:ЛазерыОптическая система,
- 12. Комплектация лазеров:488 нм
- 13. Beckman Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell
- 14. Комплектация каналов:
- 15. Система гидрофокусировкиДиаметр наконечника (nozzle): 70, 100, 150,
- 16. Настройка подведения лазерного излучения к клеткам обеспечивается
- 17. Выбор “отрывающейся” каплиРегистрация флуоресценции – клетка в
- 18. Слайд 18
- 19. Подготовка прибора к сортировке:Разогрев лазеров – 10
- 20. Слайд 20
- 21. CD3 – T лимфоцитыCD3 CD4 – T
- 22. Выделение и характеристика химиорезистентных клеток боковой популяции
- 23. Факторы, способствующие химио- и радиорезистентности глиобластомы Гипоксия,
- 24. Blue fluorescenceХимиорезистентные клетки боковой популяцииФлуоресцентные красители: Hoechst 33342Dye Cycle Violet
- 25. Спектры возбуждения красителей Dye Cycle Violet и
- 26. Оптимизация расположения каналов для получения максимального сигнала
- 27. Точеные диаграммы, позволяющие определить процент клеток боковой популяцииSP = (1,12 ± 0,14)%.
- 28. Условия сортировкиДиаметр ноззла – 70 мкмДавление –
- 29. Определение процента клеток боковой популяции в отсортированных образцах после первого пассажаSP=(31,59 ± 1,25)%,SP= (0,77 ± 0,10)%
- 30. Динамика изменения процента клеток боковой популяции в образцах после сортировки
- 31. Схема эксперимента по изучению цитотоксичности цисплатинаГрафик зависимости
- 32. Сортировка GFP+ клеток 4T1 карциномы молочной железы
- 33. IVIS Spectrum Pre-clinical In Vivo Imaging System
- 34. МикроКТ и 3D-оптическая томографияСнимки мыши с ортопической
- 35. Сортировка B220+ CD5+ лимфоцитов 488 нм488 нм561 нм
- 36. Изучение процессов переноса красителя C-AM из клеток DiL+ C-AM+ в DiL- C-AM- клетки
- 37. Спасибо за внимание
- 38. Скачать презентанцию
Флуоресценция
Слайды и текст этой презентации
Слайд 1Кафедра медицинских нанобиотехнологий МБФ
Методика проточной цитометрии и клеточной сортировки, их
применение.
Слайд 7Спектры возбуждения и испускания флуоресценции
BD FLUORESCENCE SPECTRUM VIEWER A MULTICOLOR TOOL
Слайд 9Клеточный сортер Beckman MoFLO XDP
Особенности прибора:
Скорость анализа – до 100’000
событий в секунду
Скорость сортировки – до 70’000 клеток в секунду
5
лазеров, 16 ФЭУ для регистрации флуоресценции
Слайд 10Технические характеристики:
Твердотельные лазеры с длинами волн 407, 488,
561, 592, 628 нм
14 каналов ФЭУ с фильтрами в
диапазоне длин волн от 430 до 820 нмВозможность термостатирования образца и собранных популяций клеток
Возможность одновременной сортировки до 4-х популяций
Скорость сортировки до 70000 клеток в секунду
Анализ сортировки до 100000 событий в секунду
Множество режимов сортировки от обогащения популяции до высокоэффективной сортировки без примесей других клеток.
Слайд 11
Клеточный сортер состоит из нескольких блоков:
Лазеры
Оптическая система, обеспечивающая подведение лазерного
излучения к клеткам
Оптическая система, собирающая флуоресценцию
Система светофильтров и ФЭУ, детектирующая
флуоресценциюСистема подачи обжимающей жидкости и образца
Все это есть у проточных цитофлуориметров.
Для сортировки клеток необходимы:
Пьезокристалл, разбивающий струю на капли
Система подачи заряда на капли
Анод и катод, пролетая между которыми клетки отклоняются и попадают в одну из нескольких пробирок
Вычислительный блок, координирующий работу прибора
Устройство клеточного сортера
Beckman Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell sorter: Instructions for use. 2010. 239.
Слайд 12Комплектация лазеров:
488 нм Flow-Check,
Flow-Check Pro
407 нм
Flow-Check Pro 628 нм
561 нм Rainbow Fluorescent Particles
592 нм
Слайд 13Beckman Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell sorter: Instructions for
use. 2010. 75.
Пример устройства оптических систем
Слайд 15Система гидрофокусировки
Диаметр наконечника (nozzle): 70, 100, 150, 200 мкм.
Необходимость системы
гидрофокусировки: обеспечение положения клеток ровно в центре струи, что дает
постоянное пятно контакта лазера с клеткой, что необходимо для точности регистрации флуоресценции.Beckman Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell sorter: Instructions for use. 2010. 84.
Слайд 16Настройка подведения лазерного излучения к клеткам обеспечивается с помощью микровинтов
Beckman
Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell sorter: Instructions for use.
2010. 93.
Слайд 17Выбор “отрывающейся” капли
Регистрация флуоресценции – клетка в струе,
Сортировка клеток –
клетка в капле
Beckman Coulter Inc: MoFlo XDP high-speed cell sorter:
Instructions for use. 2010. 239.
Слайд 19Подготовка прибора к сортировке:
Разогрев лазеров – 10 минут
Настройка струи –
до 5 минут (во время разогрева лазеров)
Настройка синего (488 нм)
лазера – до 5 минутНастройка остальных пар лазеров – до 5 минут
Настройка Drop delay time – до 10 минут (Flow-Check, Drop delay calibration particles)
Слайд 21CD3 – T лимфоциты
CD3 CD4 – T хелперы
СD3 CD8 –
T киллеры
PE/Cy5 (Ex – 488 nm, Em – 670 nm)
PE
(Ex – 488 nm, Em – 578 nm)Выявление T-хелперов с помощью проточной цитометрии
Слайд 22Выделение и характеристика химиорезистентных клеток боковой популяции низкодифференцированной глиомы C6
Мультиформная глиобластома – одна из самых злокачественных нейроэпителиальных опухолей
головного мозга.Средняя продолжительность жизни после
постановки диагноза составляет 15 месяцев.
Существующие методы терапии малоэффективны.
Причина – наличие субпопуляций
химиорезистентных клеток.
Трудоемки в изучении, немногочисленны.
Необходимо обогащение субпопуляций.
Слайд 23Факторы, способствующие химио- и радиорезистентности глиобластомы
Гипоксия, более эффективная репарация
поврежденной ДНК, наличие определенных микро РНК, отсутствие таргетных онкопротеинов, микроокружение
Присутствие
ABC транспортеровГен ABCB1 P-gp препятствует проникновению ксенобиотиков, в том числе лекарственных веществ в цитоплазму клетки
Ткани мозга:
В норме: ABCB1 (P-gp), ABCA2, ряд других ABC белков, имеющихся в большинстве тканей.
При онкологии: увеличение экспрессии генов ABCB1, ABCG2 белков и генов других ABC белков.
ABC транспортеры как фактор химиорезистентности глиобластомы
Слайд 24Blue fluorescence
Химиорезистентные клетки боковой популяции
Флуоресцентные красители:
Hoechst 33342
Dye Cycle Violet
Слайд 25Спектры возбуждения красителей
Dye Cycle Violet и Hoechst 33342
Спектр флуоресценции
красителя
Dye Cycle Violet
Спектры флуоресценции красителя
Hoechst 33342
Точечная диаграмма, построенная
в каналах регистрации флуоресценции красителя Dye Cycle Violet
Слайд 27Точеные диаграммы, позволяющие определить процент клеток боковой популяции
SP = (1,12
± 0,14)%.
Слайд 28Условия сортировки
Диаметр ноззла – 70 мкм
Давление – 60 psi
Разница
давлений образца и обжимающей жидкости – 0,5 psi
Частота 92500 Гц
Амплитуда
15.5 ВIntelliSort – включен
Концентрация клеток – 5*10^6/ 1 мл
Объем образца – 2 мл
Количество отсортированных клеток – 1* 10^5
Режимы сортировки – Enrich (для клеток SP), Purify (для клеток nonSP)
Напряжение на синем канале FL6 – 450 В, напряжение на красном канале Fl7 – 670 В
Температура пробирки во время сортировки – +4С
Слайд 29Определение процента клеток боковой популяции в отсортированных образцах после первого
пассажа
SP=(31,59 ± 1,25)%,
SP= (0,77 ± 0,10)%
Слайд 31Схема эксперимента по изучению цитотоксичности цисплатина
График зависимости доли погибших клеток
от концентрации цисплатина для обогащенной и необогащенной культуры клеток
Слайд 34МикроКТ и 3D-оптическая томография
Снимки мыши с ортопической карциномой 4T1-Luc2 на
35 сутки после имплантации
МОДЕЛИРОВАНИЕ И КОМПЛЕКСНАЯ РЕНТГЕНОВСКАЯ, ОПТИЧЕСКАЯ И МРТ-ВИЗУАЛИЗАЦИЯ
ПОЛИОРГАННЫХ МЕТАСТАЗОВ ОРТОТОПИЧЕСКОЙ КАРЦИНОМЫ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 4Т1 У МЫШЕЙ ЛИНИИ BALB/c. 
