Методы окрашивания микроорганизмов

различных материалах.
Ориентировочная идентификация микроорганизмов в образце.
Изучение некоторых морфологических признаков и

структур микроорганизмов (например, капсул, жгутиков и т. д.).
Изучение окрашенных мазков из колоний и чистых культур.
На сегодняшний день наиболее используемой является световая микроскопия.

подвижное изображение живого объекта, возможность микрокиносъемки и длительного наблюдения одного

и того же объекта, оценку его динамики и химизма.

В последнее время разработаны и другие способы микроскопии и микроскопы

– инверсионная и конфокальная лазерная сканирующая микроскопия.

поле. Данный вид микроскопии предназначен для исследования морфологии, размеров клеток,

их взаимного расположения, структурной организации клеток и других особенностей.

приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной.

Благодаря применению этого способа микроскопии контраст живых неокрашенных микроорганизмов резко увеличивается и они выглядят темными на светлом фоне (позитивный фазовый контраст) или светлыми на темном фоне (негативный фазовый контраст).
С помощью фазово-контрастной микроскопии изучают форму, размеры, взаимное расположение клеток, их подвижность, размножение, прорастание спор микроорганизмов и т. д.

таком освещении лучи не попадают в объектив, поэтому поле зрения

выглядит темным. Темнопольная микроскопия является очень простым, но эффективным методом и хорошо подходит для получения изображения живых и неокрашенных биологических образцов. Учитывая простоту установки, качество получаемых изображений весьма хорошее.

веществ, возникающее после воздействия на них каких-либо источников энергии: световых,

электронных лучей, ионизирующего излучения. Фотолюминесценция — люминесценция объекта под влиянием света. Если освещать люминесцирующий объект синим светом, то он испускает лучи красного, оранжевого, желтого или зеленого цвета. В результате возникает цветное изображение объекта.

родамин и др.) в виде сильно разбавленных водных растворов

световых или ультрафиолетовых лучей.
Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов,

тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмикроскопических объектов.

методы окраски
Сложные методы окраски
Люминесцентные красители (акридиновый желтый, ауромин, корифосфин)
Электронная микроскопия

Грама
окраска по Цилю — Нельсену
окраска по Романовскому —

Гимзе

препаратов проводится с помощью красителей, которые можно разделить на:
позитивные (метиленовый

синий, фуксин и др.) и негативные (нигрозин, тушь). Позитивными называются красители, окрашивающие микроорганизмы, негативными – красители, заполняющие пространство, окружающее микроорганизмы, в результате чего последние становятся видимыми как силуэты на фоне красителя;
килые (эозин, кислый фуксин, конго красный) и щелочные (основные) (гематоксилин, азур, сафранин, основной фуксин). Кислые красители связываются с веществами, имеющими щелочную реакцию (например, цитоплазматическими белками), щелочные – связываются с кислыми компонентами клеток (нуклеиновыми кислотами, рибосомами). Высокая концентрация ДНК и рибосомальной РНК в клетке бактерии делает ее более чувствительной к основным красителям. В связи с этим в микробиологической практике применяются почти исключительно основные красители.
Основные цвета окрашивания могут быть следующими: красный (основной фуксин, кислый фуксин, сафранин, конго красный); фиолетовый (генциановый фиолетовый, метиловый фиолетовый, кристаллический фиолетовый); синий (метиленовый синий, толуидиновый синий, водный синий); зеленый (малахитовый зеленый, бриллиантовый зеленый).

Окраска положена в основу дифференциации бактерий и отражает способность клеток

воспринимать и удерживать внутри клетки красящий комплекс генцианового фиолетового и йода либо терять его после обработки спиртом. Соответственно выделяют грамположительные (Bacillus, Clostridium, Staphylococcus, Streptococcus, Lactobacillus, Sarcina, etc.) и грамотрицательные (Escherichia, Pseudomonas, Erwinia, Neisseria, Rickettsia, etc.) формы.

Граму из молодых, активно растущих (обычно односуточных) культур, так как

клетки из старых культур иногда дают неустойчивую реакцию по Граму. Грамотрицательные бактерии могут выглядеть как грамположительные, если бактериальная пленка (мазок) слишком толста и обесцвечивание спиртом не проведено до конца. Грамположительные бактерии могут выглядеть как грамотрицательные, если мазок переобесцвечен спиртом.

бактерий связана с высоким содержанием липидов в клеточной стенке. Кислотоустойчивые

бактерии окрашиваются карболовым фуксином Циля при нагревании препарата в красный цвет и сохраняют эту окраску после обесцвечивания серной кислотой. Некислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются кислотой и в последующем докрашиваются метиленовым синим в синий цвет.