Продуценты антител лимфоциты. Технологии получения антител. Дисплейный метод

афинности и авидности этих антител к антигенам.
Антитела животного происхождения

имеют отличный от человеческих аминокислотный состав, что может спровоцировать выработку антииммуноглобулинов у реципиента, и что еще хуже – вызвать аллергическую реакцию.
Разработка новых методов получения антител предполагает решение вышеуказанных проблем.

В-лимфоциты имеют на своей поверхности специальные рецепторы для связывания с антигеном –

иммуноглобулины.

рецептор для IgE;
CD40 – опосредует переключение на синтез другого изотипа

Ig;
CD80 и CD86 – костимулирующие молекулы, которые обеспечивают второй сигнал для активации В-лимфоцитов, взаимодействуя с соотв. рецепторами Т-клеток;
HLA II класса – участвует в презентации антигена.

организм антигена.
Антитела содержат 4 цепи: 2 легкие и 2 тяжелые.

Содержат констабельные и вариабельные домены.

IgE (менее 0,01%).
Подклассы. У иммуноглобулинов классов G (IgG) и A (IgA)

имеется несколько подклассов: IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 и IgA1, IgA2.
Изотипы. Классы и подклассы иммуноглобулинов иначе называют изотипами, они одинаковы у всех особей данного вида.
Аллотипы. Индивидуальные аллельные варианты иммуноглобулинов в пределах одного изотипа называются аллотипами.
Идиотипы. По антигенной специфичности антитела относят к различным идиотипам.

сохраняющих способность связывать антиген.

иммуноглобулинов в пределах одного изотипа строго идентичны (независимо от специфичности

антител к антигенам). Они обеспечивают взаимодействие комплексов антиген-антитело с системой комплемента, фагоцитами, эозинофилами, базофилами, тучными клетками. При этом каждый класс иммуноглобулинов взаимодействует только с определёнными эффекторными клетками или молекулами.

они имеют очень сложное строение.
Для того чтобы клетка производила антитело,

необходимо ввести в нее гены, кодирующие его тяжелые и легкие цепи. Также нужно, чтобы генетическая конструкция, которая вводится в клетку (вектор), содержала ряд вспомогательных элементов, обеспечивающих наиболее эффективную транскрипцию и трансляцию гена в клетке.

его характеристики, как способ действия, селективность к мишени, время выведения

из организма и др.
Если необходимо модифицировать специфичность или селективность, то изменению подлежат вариабельные фрагменты антител, отвечающие за связывание с антигеном (Fab-фрагменты).
Если же нужно изменить другие параметры — время полужизни антитела, его механизм действия, — модифицируют константные участки (Fc-фрагмент).

конструкций для продукции антител in silico.
В качестве вектора используют плазмиды — кольцевые ДНК,

кодирующие как сам ген белка, так и вспомогательные элементы. Так, для экспрессии в эукариотических клетках используют промотор цитомегаловируса (CMV), обеспечивающий высокую эффективность транскрипции.

и площадь поверхности контакта антитела с антигеном слишком велика для

моделирования in silico, которое также осложняется наличием молекул воды. Поэтому приходится использовать биологические объекты, у которых есть способность очень тонко настраивать последовательность аминокислот антитела для обеспечения высочайшей аффинности к антигену.

пептидов и антител была присуждена Нобелевская премия по химии 2018

г.

в организме :
Сперва необходимо породить разнообразие генов, кодирующих вариабельные фрагменты —

так получаются библиотеки антител.
Затем нужно экспрессировать эти гены, то есть преобразовать генотип в фенотип.
Потом нужно осуществить селективное давление, которое бы заставило генотип эволюционировать.
И наконец необходимо амплифицировать полученный результат.

Различные генетические последовательности, вставленные в ген синтеза капсида, экспрессируются в

бактериофагах, таким образом, на оболочке каждого фага «отображается» свой белок, соответствующий внесенным генетическим изменениям.
3. Эти бактериофаги помещаются на планшет, и спустя некоторое время, которое требуется для связывания, смываются с него.
4. Таким образом, на планшете останутся только те фаги, которые хорошо связались с целевыми молекулами, а остальные будут смыты.
5. Связавшиеся фаги могут быть элюированы(отмыты) и использованы для получения новых фагов путём заражения подходящих бактерий-носителей. Новая популяция фагов представляет собой смесь, в которой намного меньше нерелевантных (не связывающихся с целевыми молекулами) фагов, чем в изначальной смеси.
6. Шаги 3-5 опционально можно повторить несколько раз для получения более богатой специфичными фагами популяции.
7. После амплификациии с помощью бактерий секвенируется ДНК полученных специфичных фагов для определения белков или их фрагментов, взаимодействующих с целевыми молекулами.

иммунизации крупных животных.
В настоящее время существует 2 методики получения антител

in vitro: метод молекулярных гибридом и метод фагового дисплея.
Преимущество метода фагового дисплея состоит в том, что можно создать антитела с высокой афинностью и авидностью.
Получаемые антитела можно гуманизировать.