Слайд 1
ГБОУ ВПО «ТИХООКЕАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ МЗСР РФ»
Кафедра микробиологии
и вирусологии
БАКТЕРИОФАГИЯ
д.м.н., проф. Шаркова В. А.
Слайд 2
Фаги
Бактериофаги - это вирусы,
паразитирующие на бактериальных клетках
Бактериофагия – процесс взаимодействия фагов с бактериями, заканчивающийся очень часто
их разрушением
(bacteriophaga – пожирающий бактерию)
Слайд 3ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКА
1898 г. – Н. Ф. Гамалея наблюдал спонтанный лизис
бактерий (фильтрат сибиреязвенных бацилл вызывает лизис свежих культур этих МКО)
1915
г. – Ф. Туорт описал феномен «стекловидного» перерождения стафилококков (белые непрозрачные колонии стафилококка становились прозрачными и исчезали, а агент, их лизирующий, проходит через бактериальные фильтры, сохраняя способность растворять свежие культуры этих микробов)
Слайд 4
1917 г. – Д`Эррель подробно изучил взаимодействие фага
и бактерий и дал литическому агенту название «бактериофаг»:
вносил фильтрат испражнений
больного дизентерией в пробирки со свежезасеянной культурой возбудителя этой болезни. Культура дизентерийных бактерий разрушалась (лизировалась), что послужило основанием считать данный агент живым корпускулярным
Bacteriophagum intestinal – выделенный из кишечника пожиратель бактерий
Слайд 5
Бактериофаги распространены повсеместно
Они встречаются всюду, где есть
бактерии – в почве, воде, кишечном тракте, гнойных выделениях и
т.д.
Из сточных вод можно выделить практически любой фаг
Слайд 6
Классификация фагов
по типу нуклеиновой кислоты
по типу симметрии
- спиральная
- кубическая
- бинарная
по
форме
по размерам
- мелкие
- средние
- крупные
Слайд 7
Классификация бактериофагов
Слайд 9СТРОЕНИЕ ОСНОВАНИЯ БАКТЕРИОФАГА Т4
Слайд 12
СПЕЦИФИЧНОСТЬ
Фаги обладают строгой специфичностью
- видовая специфичность –
фаги
паразитируют только в определенном виде
микробов
- типовая специфичность - на определенных представителях данного вида
поливалентные фаги – лизируют
микроорганизмы близких видов
Слайд 13
инфекционные фаги – способны
вызвать разные формы
фаговой
инфекции
неинфекционные (вегетативные)-
незрелые фаги, находящиеся
в стадии
размножения
инфекционные фаги
покоящиеся – находятся вне клетки
вирулентные – вызывают
продуктивную
форму инфекции
умеренные – способны вызывать
продуктивную и редуктивную фаговую
инфекцию
форма жизненного цикла фага
продуктивная инфекция
редуктивная инфекция
абортивная инфекция
Слайд 16
Механизм действия бактериофагов
Адсорбция бактериофагов на бактериальных клетках
Инъекция
ДНК бактериофага внутрь бактерии
Репликация копий ДНК бактериофага, синтез капсида
и отростков фаговых вирионов
Сборка вирионов
Лизис бактериальной клетки
Вышедшие в культуральную среду в результате
лизиса бактериальных
клеток бактериофаги
повторно инфицируют
и затем лизируют
другие МКО
Слайд 17Биологи во главе с Майклом Россманом получили детальное изображение процесса
инфекции бактерии E. Сoli бактериофагом Т4. По ним исследователи восстановили
процесс прокалывания клеточной мембраны вирусом. В течение этого процесса бактериофаг изменяет форму своего основания (формой похожего на цветок) для того, чтобы эффективно присоединиться к клеточной мембране и проколоть ее специальным "стержнем", который выдвигается по мере того, как основание изменяет свою форму. Для того, чтобы добиться такой трансформации основания, ряд белков, его составляющих, изменяют свою форму. С помощью криоэлектронной микроскопии команда исследователей получила ряд изображений основания, по которым была восстановлена динамика процесса.
По результатам исследователей был составлен видеофильм, который объясняет, как работает механизм "впрыска" бактериофага Т4. Исследователи надеются, что знание механизма работы иньектора бактериофага поможет в будущих методах доставки лекарств.
Слайд 19МОДЕЛЬ РАБОТЫ БЕЛКОВОЙ МАШИНЫ ВПРЫСКА ФАГА Т4
Слайд 21
Бактериальная клетка с адсорбированными на ней бактериофагами
Слайд 22
Бактериофаги, сорбированные на клетке
Слайд 24
профаг – встроенная в хромосому бактериальной клетки нуклеиновая
кислота фага (плазмида, генетический материал, меняющий свойства МКО)
лизогенная клетка
– бактериальная клетка, несущая профаг
лизогения – явление симбиоза микробной клетки с умеренным фагом
лизогенная культура – культура, в которой имеется профаг
Слайд 25
Лизогенная конверсия –
форма изменчивости, при которой
бактериальная клетка, благодаря умеренному фагу, получает новые наследуемые признаки
Слайд 26
Практическое применение
в промышленности, сельском хозяйстве
в теоретических и
научных исследованиях
в медицине
- в фагодиагностике
- в фаготипировании
- профилактике
- лечении
Слайд 27
Препараты бактериофагов
Иммунобиологические препараты, созданные на основе вирусов бактерий.
Используются для диагностики, профилактики и лечения бактериальных инфекций
Антибактериальный эффект,
оказываемый препаратами бактериофагов, обусловлен специфическим лизисом патогенных бактерий в очаге воспаления под действием бактериофагов
Слайд 28ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ФОРМЫ
Жидкие фаги (применяли местно, перорально, в полости, внутримышечно, подкожно
и внутривенно)
Таблетированные (в том числе с кислотоустойчивым покрытием)
Жидкий концентрат (очищен
от белкового балласта)
Мазь
Линимент
Гель
Свечи
Аэрозоли
Слайд 29ПОКАЗАНИЯ К ПРИМЕНЕНИЮ БАКТЕРИОФАГОВ
Заболевания дыхательных путей (пневмония, плеврит, ангина)
Инфекции
почек и мочевыводящих путей (цистит, пиелонефрит, уретрит)
Заболевания желудочно-кишечного тракта
(колит, энтероколит, брюшной тиф, дизентерия, сальмонеллез, дизбактериоз, диспепсия)
Воспалительные заболевания желчного пузыря (холецистит)
Инфекции кожи (пиодермия, фурункулёз, абсцесс, инфекции ран)
Препараты рекомендуются с лечебной и профилактической целью (при операциях на желудочно-кишечном тракте, при перитонитах, акушерских операциях, ампутациях и открытых переломах костей, ожогах, артритах и т.п.)
Слайд 30ПРЕИМУЩЕСТВА ФАГОТЕРАПИИ
Высокая специфичность
Отсутствие побочных эффектов
Отсутствие противопоказаний
Не вызывают аллергию
Могут применяться
вместе с антибиотиками и иммунопрепаратами
Активность в отношении антибиотико-резистентных штаммов
Адаптация
бактериофагов к современным возбудителям
Не влияет на нормофлору кишечника
Отсутствие побочных патологических реакций
Бактериофаги могут быть использованы для лечения заболеваний беременных женщин, новорожденных и детей раннего возраста
Слайд 31ВЛИЯНИЕ БАКТЕРИОФАГОВ НА ИММУНИТЕТ
Несмотря на способ применения (местное или общее),
фаги проникают в кровь, лимфу и попадают в очаг воспаления,
оказывая положительное влияние на иммунитет
Под воздействием фага в первую очередь происходит активация фагоцитоза, повышается активность нейтрофилов, что препятствует рецидивированию инфекции и хронизации воспалительного процесса
Отмечено снижение количества лейкоцитов и нейтрофилов, а уровень лимфоцитов повышается преимущественно за счет Т-лимфоцитов
При лечении интести бактериофагом острой дизентерии отмечено повышение клеточного иммунитета в большей степени, чем при лечении антибиотиками
Слайд 32
Критерий эффективности фаготерапии
Перед использованием препарата необходимо тестировать его
на литическую активность в отношении конкретной культуры (определение фагочувствительности возбудителя)
Слайд 33
Экология стихийно циркулирующих бактериофагов
в стационарах наряду с интенсивной
циркуляцией госпитальных штаммов имеет место спонтанная циркуляция различных типов бактериофагов
Слайд 34
Экологические аспекты стихийной циркуляции бактериофагов
Спонтанно циркулирующие фаги, не
обладая достаточной вирулентностью, не способны оказывать ни клинического, ни эпидемиологического
эффекта
в госпитальных условиях возможно формирование устойчивых паразитарных экосистем, состоящих из возбудителя ГСИ (гнойно-септической инфекции), бактериофага и биотопа их совместного существования (раны больного)
Слайд 35
Слабая вирулентность фага обеспечена :
Умеренностью большинства
циркулирующих фагов
Лизогенностью циркулирующих штаммов
бактерий
Другие свойства ,
приводящие к
формированию резистентности культур к
спонтанно циркулирующим с ними фагам
Слайд 36
Влияние данных экосистем на свойства госпитальных штаммов
Образование МКО-ов
с
полирезистентностью к антибиотикам в
результате
формирования
лизогенных культур,
другого феномена, действие которого проявляется в условиях сосуществования культур микроба и спонтанно циркулирую- щих слабоактивных бактериофагов
Слайд 37
Недопустимо применение фаговых препаратов
не обладающих полной адаптацией и
литической активностью к циркулирующим штаммам. В этом, очевидно, кроется недостаточная
эффективность централизованно приготовленных коммерческих фагов
Слайд 38
Профилактика формируемой лизогенности под воздействием спонтанно циркулирующих малоактивных фагов:
использование высоковирулентных
адаптированных бактериофагов
Слайд 39
Использование высокоактивных фагов, адаптированных к госпитальным штаммам, способных
к ликвидации устойчивых саморегулирующихся взаимоотношений в паразитарных экосистемах и способных
к широкому распространению, позволяет добиться не только клинического, но и выраженного эпидемиологического эффекта, проявляющегося в резком снижении частоты внутрибольничных заражений
Слайд 40
Раневые бактериофаги (фильтраты фаголизатов бактерий)
стафилококковый (стафилофаг)
стрептококковый (стрептофаг)
колифаг
протейный (протеофаг, колипротейный)
синегнойный (аеругинозофаг)
пиополифаг (стаф., стрепт., энтерок.,
протей, синегн. и кишечная
палочки)
пиобактериофаг
поливалентный (-»- +
клебсиеллы пневмонии)
Слайд 41
Кишечные бактериофаги (фильтраты фаголизатов бактерий)
дизентерийный (дизфаг – шигеллы
Зонне
и Флекснера)- жидк., табл.
брюшнотифозный (сальм. Бр.
тифа) -табл.
сальмонеллезный (гр. А – паратиф А, гр. В –
паратиф В, тифимуриум, гейдельберг,
ньюпорт, холера суис, ораниенбург,
инфантис, Д – дублин, энтеритидис, Е –
анатум, ньюландс) – табл., жидк.
колифаг- жидк.
Слайд 42
Кишечные бактериофаги
Интести (шигелл Зонне,
Флекснера –1,2,3,4,6 типов
сальмон.
–паратифа А, В,
тифимуриум, суис, инфантис,
ораниенбург, ЭПКП, протей,
стаф., энтерокок., синегнойн.
палочка) - жидк. (перорально,
ректально)
Колипротейный - жидк.
Колипротеофаг - табл.
Синегнойный (аеругинозофаг)
– жидк.
Слайд 43
препараты бактериофагов
Пиобактериофаг поливалентный очищенный
Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный
Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный
Слайд 44
Пиобактериофаг поливалентный очищенный жидкий
Новый препарат, не имеющий мировых
аналогов, разработан и выпускается в филиале "Иммунопрепарат" ФГУП «НПО «Микроген»
МЗ РФ, защищен патентами России, активен в отношении 82-89% бактерий Klebsiella, Escherichia, Proteus, Pseudomonas, Staphylococcus, Streptococcus
Слайд 45
Бактериофаг клебсиелл пневмонии очищенный жидкий
Очищен (97,7%-99,6%) от бактериальных
метаболитов, токсинов и балластных веществ, нереактогенен, не вызывает токсических и
аллергических реакций, не имеет противопоказаний к применению, активен (83-87%) в отношении бактерий Klebsiella pneumoniae, клинически эффективен в 82-89% случаев заболеваний
Слайд 46
Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный жидкий
активен в отношении бактерий
Klebsiella pneumoniae (83-87%), Klebsiella ozaenae (82-86%), Klebsiella rhinoscleromatis (89-91%), впервые
в мире используется для лечения и профилактики озены (клиническая эффективность 80-100%), склеромы (клиническая эффективность 81-83%)
Слайд 47НОВЫЕ ПРЕПАРАТЫ
Комплексный биологический препарат «Интерфаг» - создан для лечения заболеваний
вирусно-бактериальной этиологии. Содержит интерферон и бактериофаги. Успешно применяли в стоматологической
практике для лечения пародонтита (положительный эффект составил 85%, ремиссия продолжалась до 1 года)
Материал Bioderm - состоит из перфорированного биодермического неядовитого полимера, содержащего бактериофаги и другие терапевтические составляющие. Не препятствует дыханию поврежденных тканей и одновременно предотвращает инфекцию
Слайд 48ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФЕРМЕНТОВ БАКТЕРИОФАГОВ
Литические ферменты бактериофагов достаточно быстро разрушают клеточную стенку
бактерий.
Изучалась муреиновая гидролаза (лизин), которая продуцируется стрептококковым бактериофагом С(1). Этот
фермент специфичен в отношении стрептококков групп А, С, и Е и не обладает активностью против других стрептококков и микроорганизмов, которые являются нормальными обитателями полости рта и носоглотки.
Исследователи доказали, что 1000 единиц (10 нг) фермента достаточно для эрадикации 107 стрептококков в течение 5 секунд
Слайд 49ЛИТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ФАГОВ
Для стафилококков – от 72 до 88%
Для стрептококков
– 60-82%
Для кишечной палочки – 30-85%
Для синегнойной палочки – 59-74%
Для
протея – 29-82%
Слайд 50ЛЕЧЕНИЕ РАН
Бактериофаги вводят в рану путем:
распыления
орошения
смачивания салфеток и турунд
вливания через
дренажные трубки
Клиническое улучшение и заживление ран происходит в среднем на
3-6 суток быстрее, чем при применении антибиотиков
Слайд 51ЛЕЧЕНИЕ И ПРОФИЛАКТИКА КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ
Установлено сокращение дизентерийных заболеваний у получавших
лечебные фаги в 2,3 раза.
Получены результаты, свидетельствующие о высокой эффективности
адаптированного сальмонеллезного бактериофага, что позволило справиться с внутригоспитальной эпидемией сальмонеллеза без антибиотиков, которая продолжалась в течение 3 лет и не поддавалась антибактериальной терапии.
Слайд 52ЛЕЧЕНИЕ УРОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ
Пероральное применение пиобактериофага и дополнительное введение по дренажам
позволило санировать мочевые пути у урологических больных в 87,5% случаев
и достичь клинико-лабораторного улучшения на 4-5-е сутки
У больных, не получавших бактериофаги, нормализация этих показателей происходила на 2-3 суток позже, а полная санация достигнута только у 30% пациентов
Слайд 53ЛЕЧЕНИЕ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ БОЛЬНЫХ С ПОСЛЕОПЕРАЦИОННЫМИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ОСЛОЖНЕНИЯМИ
При использовании бактериофагов отмечен
положительный результат в 81,5% случаев, при лечении антибиотиками – в
60,6%.
Заживление ран происходило без образования деформирующих рубцов и на 6 суток быстрее, чем без бактериофагов
Слайд 54ЛЕЧЕНИЕ ОЖОГОВЫХ БОЛЬНЫХ
Хороший эффект достигался при пероральном лечении таблетированным пиобактериофагом
Значительно
снижалась обсемененность ран
Отмечено более гладкое течение раневого процесса
Раны быстрее очищались
от некротических тканей
Быстрее происходило формирование грануляций
В целом положительная клиническая динамика отмечена у 92,6% больных, у пациентов контрольной группы за те же сроки – в 42,5%
Сократилось количество больных, из крови которых высевали микроорганизмы
Улучшились показатели клеточного и гуморального иммунитета
Летальность среди больных, получавших фаги, была в 5 раз меньше
Использование в виде аппликаций на раны бактериофага из ацинетобактера позволило снизить уровень
заболеваемости гнойно-септическими
инфекциями, вызванными ацинетобактером в
ожоговом стационаре в 2,2 раза
Слайд 55ВЛИЯНИЕ АЭРОЗОЛЬНОЙ ОБРАБОТКИ ПОЛИФАГОМ НА МИКРОБНУЮ ОБСЕМЕНЕННОСТЬ ВОЗДУХА ПОМЕЩЕНИЙ ХИРУРГИЧЕСКОГО
ОТДЕЛЕНИЯ
Слайд 56
применение бактериофагов в гинекологии: бактериальный вагиноз, уретрит, цистит,
простатит, дисбактериоз влагалища и кишечника и другие
Слайд 57ОСНОВНЫЕ ПРЕДПРИЯТИЯ, ВЫПУСКАЮЩИЕ ПРЕПАРАТЫ БАКТЕРИОФАГОВ В РФ
Биомед (г. Пермь)
НПО «Иммунопрепарат»
(г. Уфа)
МП «Биофон» (г. Саратов)
Предприятие по производству бактерийных препаратов (г.
Нижний Новгород)
Слайд 58Активно изучаются новые пути терапии, одним из которых является лечение
инфекций не живыми фагами, а использование ферментов, лизирующих бактерии. Действие
ферментов, как и фагов, строго специфично. Предполагается использовать их в виде назального спрея.
Кроме того, разрабатываются средства личной гигиены (зубная паста), а также продукты питания (йогурт), содержащие бактериофаги. Такое применение бактериофагов направлено на снижение колонизации патогенными микроорганизмами и отвечает концепции профилактической медицины.
Наряду с созданием новых видов и форм лечебных бактериофагов целесообразно проведение дальнейших молекулярно-генетических и клинико-эпидемиологических исследований по изучению биохимии взаимодействия и влияния фагов на биологические свойства возбудителей инфекционных заболеваний
НОВЫЕ НАПРАВЛЕНИЯ В ФАГОТЕРАПИИ
Слайд 59
Методы изучения вирулентных фагов
качественные
количественные
- титрование фага
по Аппельману
- титрование фага по Грация
Lysis of Bacillus anthracis
by the
lytic phage gamma
Слайд 60
Материал – фильтраты, получен- ные с помощью бактериальных фильтров
из
объектов внешней среды
органов
выделений человека и животных
культур
микроорганизмов
Слайд 61
степень вирулентности выражается титром
титр – то максимальное
разведение (минимальное количество), при котором проявляется литическое действие фага на
бактериальную клетку
Слайд 62
РНТФ –
реакция нарастания титра фага
исследуемый материал
(от больного,
из объекта внешней среды)
тест культура
МПБ