Разделы презентаций


БИОИНЖЕНЕРИЯ. №2 Na’ обладает более мощным взаимодействием с солнечной

Содержание

Молекулярное клонированиеПолучение идентичной копии молекулы ДНК (чаще всего в больших количествах).Основа молекулярной биологии и биоинженерии!Ключевые составляющие технологии:эндонуклеазы рестрикции,плазмидные ДНК бактерий – кольцевые молекулы, способные к саморепликации в бактериальных клетках, ДНК-лигаза, процесс

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1БИОИНЖЕНЕРИЯ. №2
Na’ обладает более мощным взаимодействием с солнечной энергией. Чем

сильнее в очищении Na, тем он мощнее в приеме солнечной

энергии. Взаимодействие Na-основы и Na’, будет давать Na’’. Т.е. система объединений энергий – это очищение. Изначальный Na уже не существует, он провзаимодействовал с Na’ и все его действия при этом закончились. Был Na-изначальный, добавили Na-жженый = Na’ – клон №1. К Na’ добавили Naж’ = Na’’. Следующий клон – Na’’ сжигается, получается Na’’ + Na’’жженый = патрица.  Na-патрица + Na-патрица(жженый) = Na-матрица Патрица – это клон в действии. Т.е. первоосновный Na не дает Матрицу и Патрицу, их дает процесс последовательного клонирования.

Леонтьева А.И., «Здоровье человека – это состав его крови». Журнал «Успехи современного естествознания», 2010, №12, стр. 85-88.

Клонирование – это из 10 мл, взятой из вены крови – 3 мл выпиваются, 7 мл переводятся в пепельную структуру в печах при температуре 600 0С, и принимают во внутрь в капсулах.  При клонировании идет пересоздание элементов – это тот же элемент, но уже «качественней». Был изначально Na, после клонирования стал Na-полиэстер, т.е. Na с другой энергией, т.е. при клонировании идет процесс, способный давать «великое из простого». В центре Na тот, что был изначально. В клоне он имеет более высокую энергию «Na’». «Na’» – это натрий полученный за счет насыщения энергий изначального Na, являющегося основой.

БИОИНЖЕНЕРИЯ. №2Na’ обладает более мощным взаимодействием с солнечной энергией. Чем сильнее в очищении Na, тем он мощнее

Слайд 2Молекулярное клонирование
Получение идентичной копии молекулы ДНК (чаще всего в больших

количествах).


Основа молекулярной биологии и биоинженерии!
Ключевые составляющие технологии:

эндонуклеазы рестрикции,
плазмидные ДНК бактерий

– кольцевые молекулы, способные к саморепликации в бактериальных клетках,
ДНК-лигаза,
процесс трансформации – попадание экзогенной ДНК в бактериальную клетку.
Молекулярное клонированиеПолучение идентичной копии молекулы ДНК (чаще всего в больших количествах).Основа молекулярной биологии и биоинженерии!Ключевые составляющие технологии:эндонуклеазы

Слайд 3Общая схема молекулярного клонирования

Общая схема молекулярного клонирования

Слайд 4Эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы)
Ферменты, относящиеся к гидролазам, катализирующие реакцию гидролиза нуклеиновых

кислот.
Три типа рестриктаз:

1. Тип 1 - узнают определённую последовательность нуклеотидов

и разрезают двуцепочную молекулу ДНК неподалёку от этой последовательности в произвольной точке; само место разреза не строго специфично.

2. Тип 2 - узнают определённую последовательность и разрезают двуцепочную молекулу ДНК в определённой фиксированной точке внутри этой последовательности.

3. Тип 3 - узнают нужную последовательность и разрезают двуцепочную молекулу ДНК, отступив определённое число нуклеотидных пар от её конца (или в нескольких точках на разном удалении от сайта узнавания).

Эндонуклеазы рестрикции (рестриктазы)Ферменты, относящиеся к гидролазам, катализирующие реакцию гидролиза нуклеиновых кислот.Три типа рестриктаз:1. Тип 1 - узнают

Слайд 5В молекулярном клонировании чаще всего используются
рестриктазы второго типа.

В молекулярном клонировании чаще всего используются рестриктазы второго типа.

Слайд 6При выделении геномной ДНК и ее обработке рестриктазой получается набор

фрагментов разной длины

При выделении геномной ДНК и ее обработке рестриктазой получается набор фрагментов разной длины

Слайд 7При действии рестриктаз на ДНК образуются концы разных типов

При действии рестриктаз на ДНК образуются концы разных типов

Слайд 8Вектор – рекомбинантная самореплицирующаяся молекула ДНК, в которую встраивается фрагмент

чужеродной (клонируемой) ДНК.


• Способность к длительному существованию в клетках-хозяевах (репликация

автономная или в составе хромосом),

• Наличие биохимических или генетических маркеров, которые позволяют обнаруживать его присутствие в клетках,

• Должны допускать встраивание чужеродной ДНК без нарушения своей функциональной целостности
Вектор – рекомбинантная самореплицирующаяся молекула ДНК, в которую встраивается фрагмент чужеродной (клонируемой) ДНК.• Способность к длительному существованию

Слайд 9Плазмиды – внехромосомные кольцевые молекулы ДНК
Чаще всего – кольцевые

двуцепочечные молекулы

Встречаются у бактерий, архей, редко – у эукариот

Кодируют факторы адаптации к неблагоприятным условиям (белки устойчивости к антибиотикам)

Переходят из клетки в клетку путем конъюгации, служат средством горизонтального переноса генов
Плазмиды – внехромосомные кольцевые молекулы ДНК Чаще всего – кольцевые двуцепочечные молекулы Встречаются у бактерий, архей, редко

Слайд 10Бактериальные плазмиды – идеальные векторы для молекулярного клонирования
• Способны к

автономной репликации

• В зависимости от ориджина репликации, в клетке может

содержаться различное число копий плазмиды
- Низкокопийные (1-2 копии на клетку)
- Высококопийные (10-100 копий на клетку)

• Относительно небольшие размеры

• Одна клетка может содержать несколько разных плазмид

• Можно встроить гены-репортеры (например, гены устойчивости к антибиотику)

• Легко выделять из клетки, манипулировать и направленно транспортировать в клетку
Бактериальные плазмиды – идеальные векторы для молекулярного клонирования• Способны к автономной репликации• В зависимости от ориджина репликации,

Слайд 11Плазмидный вектор pUC118
bla – Ген β-лактамазы, селектируемый маркер (устойчивость ампициллину)
ori

– Ориджин репликации
lacZ ‘ и lacI – гены, необходимые для

бело-голубой селекции (об этом ниже)

Самое интересное – это полилинкер!
(он же multiple cloning site)

Плазмидный вектор pUC118bla – Ген β-лактамазы, селектируемый маркер (устойчивость ампициллину)ori – Ориджин репликацииlacZ ‘ и lacI –

Слайд 12Наличие на концах плазмиды и вставки одинаковых липких или тупых

концов позволяет получить молекулу рекомбинантной ДНК, в которой вставка будет

ковалентно соединена с плазмидой.
Наличие на концах плазмиды и вставки одинаковых липких или тупых концов позволяет получить молекулу рекомбинантной ДНК, в

Слайд 13ДНК-лигаза: фермент, ковалентно соединяющий друг с другом два фрагмента ДНК

ДНК-лигаза: фермент, ковалентно соединяющий друг с другом два фрагмента ДНК

Слайд 14Продукты лигирования вектора и вставки

Продукты лигирования вектора и вставки

Слайд 15Преимущество двух разных липких концов при лигировании
Использование при клонировании двух

разных рестриктаз с липкими концами приводит к тому, что вставка

встраивается в вектор в однозначной ориентации.
Преимущество двух разных липких концов при лигированииИспользование при клонировании двух разных рестриктаз с липкими концами приводит к

Слайд 16Щелочная фосфатаза – маленький помощник биоинженера!
Фермент удаляет фосфатные группы с

5’-концов линеаризованного вектора, и он не может самолигироваться. При добавлении

вставки и ДНК-лигазы происходит лигирование одной цепи, а во второй цепи остается разрыв («nick»), который впоследствии залечивается репарационными системами бактерий.
Щелочная фосфатаза – маленький помощник биоинженера!Фермент удаляет фосфатные группы с 5’-концов линеаризованного вектора, и он не может

Слайд 17Трансформация
Бактерия до попадания внутрь
рекомбинантной плазмиды
Бактерия после попадания внутрь
рекомбинантной плазмиды
В терминах

биоинженерии трансформация – это направленное внесение в бактериальную клетку рекомбинантного

вектора.
ТрансформацияБактерия до попадания внутрьрекомбинантной плазмидыБактерия после попадания внутрьрекомбинантной плазмидыВ терминах биоинженерии трансформация – это направленное внесение в

Слайд 18Солевая трансформация
Ионы кальция (+) связываются и с ДНК (-), и

с липополисахаридами клеточной стенки E.coli (-), «соединяя» тем самым одно

с другим.

Тепловой шок приводит к образованию пор в клеточной оболочке, и ДНК устремляется туда. Поры затем зарастают. Bingo!
Солевая трансформацияИоны кальция (+) связываются и с ДНК (-), и с липополисахаридами клеточной стенки E.coli (-), «соединяя»

Слайд 19Электропорация
Короткий электрический разряд создает в бактериальных оболочках поры, куда и

устремляется ДНК. Процессу помогает появившееся электрическое поле. Поры затем зарастают.

Bingo!
ЭлектропорацияКороткий электрический разряд создает в бактериальных оболочках поры, куда и устремляется ДНК. Процессу помогает появившееся электрическое поле.

Слайд 20Основной смысл трансформации как этапа молекулярного клонирования:

В большинстве случаев в

одну бактериальную клетку попадает одна молекула ДНК!

Основной смысл трансформации как этапа молекулярного клонирования:В большинстве случаев в одну бактериальную клетку попадает одна молекула ДНК!

Слайд 21После трансформации:

Высеваете суспензию клеток на чашку Петри (с антибиотиком)
Если вы

все правильно рассчитали, на чашке вырастают индивидуальные колонии, каждая из

которых есть потомство одной клетки
В большинстве случаев плазмидная ДНК, выделенная из одного клона, является гомогенным препаратом плазмиды
Если вам очень повезло, то эта плазмида еще и содержит нужную вам вставку!

После трансформации:Высеваете суспензию клеток на чашку Петри (с антибиотиком)Если вы все правильно рассчитали, на чашке вырастают индивидуальные

Слайд 22Бело-голубая селекция
Геном бактерий, используемых в клонировании, содержит одну субъединицу в-галактозидзы.

Плазмида кодирует вторую. Они соединяются в активный фермент, который превращает

субстрат X-Gal в продукт синего цвета. Для этого также нужен IPTG, индуктор синтеза второй субъединицы.
Бело-голубая селекцияГеном бактерий, используемых в клонировании, содержит одну субъединицу в-галактозидзы. Плазмида кодирует вторую. Они соединяются в активный

Слайд 23А встраивание-то в плазмиду происходит в аккурат в середину гена

второй субъединицы! И если оно случилось, никакой нормальной субъединицы не

синтезируется, и никакого синего цвета у вас не будет!
А встраивание-то в плазмиду происходит в аккурат в середину гена второй субъединицы! И если оно случилось, никакой

Слайд 24На синие колонии можете даже внимания не обращать.
Дальше работаем только

с белыми!

На синие колонии можете даже внимания не обращать.Дальше работаем только с белыми!

Обратная связь

Если не удалось найти и скачать доклад-презентацию, Вы можете заказать его на нашем сайте. Мы постараемся найти нужный Вам материал и отправим по электронной почте. Не стесняйтесь обращаться к нам, если у вас возникли вопросы или пожелания:

Email: Нажмите что бы посмотреть 

Что такое TheSlide.ru?

Это сайт презентации, докладов, проектов в PowerPoint. Здесь удобно  хранить и делиться своими презентациями с другими пользователями.


Для правообладателей

Яндекс.Метрика