Лекция 5

в кристаллической форме.

1941 г.- открытие Лёффлером и Фрошем возбудителя

ящура. Всеобщее принятие концепции о наличии фильтрующихся ультрамелких инфекционных частиц.

1892 г - доклад Д.И.Ивановского о возможности переноса мозаики табака соком, пропущенным через бактериальные фильтры и назвал возбудителей этой болезни фильтрующимся вирусом.
1898 г. М. Бейеринк дал общее название микроорганизмам, проходящим через бактериальные фильтры, “фильтрующиеся вирусы”.

Из истории открытия вирусов

Дмитрий Иосифович
Ивановский

медико-биологических наук
Интерес к вирусологии обусловлен:

ведущей ролью вирусов в инфекционной патологии

человека и животных.

на моделях вирусов разрешают многие фундаментальные вопросы биологии (например, об интронах, сплайсинге или онкогенах).

одним из крупнейших вкладов вирусологии в современную науку считают открытие обратной транскриптазы, использование которой лежит в основе генной инженерии.

открытие было отмечено Нобелевской премией.
Д. Балтимор
Х. Темин
РНК-зависимая ДНК полимераза (обратная

транскриптаза)

Фундаментальное значение открытия: опровергло центральную догму молекулярной биологии, постулированную Дж. Уотсоном.
Практическое значение открытия: положило начало исследованиям, направленным на поиск лекарственных средств, блокирующими работу этого фермента. Такие лекарства являются мощным средством в борьбе с вирусными инфекциями, вызываемыми РНК-вирусами.

ДНК

Обратная
транскриптаза

Vira), обладающих собственным геномом, способных к воспроизведению в клетках всех

видов организмов.
Вирусы - наименьшие (размеры вирусных частиц составляют от 15-18 до 300-350 нм ) по размерам агенты, все они проходят через бактериальные фильтры, практически недоступны для изучения в световом микроскопе и лишены типичных метаболических и репродуктивных потенций, характерных для живых организмов.
Вирусы - облигатные внутриклеточные паразиты клеток человека, животных, растений, грибов и бактерий (т. е. всех эукариотов и прокариотов), их репродуктивные процессы целиком зависят от состояния клетки-хозяина.

внеклеточной (вирион) и внутриклеточной (вирус) .
Вирусы содержат нуклеиновую кислоту только

одного типа - или ДНК, или РНК, что использовано для классификации вирусов;
У них отсутствует клеточное строение, а следовательно и все клеточные органоиды, белоксинтезирующие и ферментные системы;
Вирусы не способны размножаться вне живой клетки;
Для репродукции вируса необходима только нуклеиновая кислота;
Вирусы способны интегрировать в клеточный геном и реплицировать синхронно с нуклеиновой кислотой хозяина.
Размеры вирусов варьируют в пределах примерно от 20 до 350 нм, что в среднем в сто раз меньше бактерий.

смешанной (из протеинов и липидов) оболочкой.
Вирусы представляют собой субмикроскопические образования,

состоящие из белка и нуклеиновой кислоты. У вирионов белковая оболочка, в которую заключена нуклеиновая кислота, называется капсид. Иногда капсид покрыт вирусной мембраной – двойным слоем липидов, который называют суперкапсидом.
Размеры вирусов определяют с помощью электронной микроскопии, методом ультрафильтрации через фильтры с известным диаметром пор, методом ультрацентрифугирования.

Форма различных вирусов:
1-вирус оспы (самый крупный среди вирусов); 2-вирус герпеса; 3-аденовирус; 4-паповавирус; 5-гепадновирус; 6-парвовирус; 7-паромиксовирус; 8-вирус гриппа; 9-коронавирус; 10-аренавирус; 11-ретровирус; 12-реовирус; 13-пикорнавирус; 14-капицивирус; 15-рабдовирус; 16-флавовирус, тогавирус; 17-буньявирус

наличие вирусных частиц.
Их выделили в четвертый домен живых организмов –

Megavirales (семейства Marseilleviridae, Mimiviridae и Iridoviridae).
Megavirales существует в природе параллельно доменам Bacteria, Archaea и Eukarya. Огромный геном позволяет им иметь широкий круг хозяев среди простейших, моллюсков, членистоногих и других животных.

Мегавирусы открыли в 2003 году в амебах французские ученые

Mimiviridae могут вызывать тяжелые пневмонии, кератиты, энтериты у человека.

культивирования вирусов в эмбрионах кур. Кроме куриных эмбрионов, в лабораториях

вирусы культивируются 1)в культурах соматических клеток, 2)в эксплантах органов и 3)в организмах восприимчивых животных. Вирусы не способны расти на питательных средах для бактерий и соматических клеток.

Культивирование вирусов в куриных эмбрионах

Культивирование вирусов в соматических клетках

Культивирование вирусов
проводят с целью получения диагностических и вакцинных препаратов, для лабораторной диагностики вирусных инфекций, в научно-исследовательской работе при изучении разнообразных вопросов иммунитета и генетики.

клеток с помощью оптического микроскопа.

О наличии вирусов в культуре клеток

судят по следующим признакам:
1) образованию бляшек (участков разрушенных вирусами клеток при культивировании вирусов в однослойных клеточных культурах, покрытых тонким слоем агара);
2) образованию в клетках включений (скопления вирусных частиц, вирусных белков или клеточного материала, обнаруживаемых в ядре или цитоплазме при специальных методах окраски);
3) цитопатическому эффекту (видимые под микроскопом морфологические изменения клеток, вплоть до их гибели, возникающие в результате повреждающего действия вирусов);
4) цветной реакции с продуктами метаболизма (основана на разнице в цвете питательной среды с индикатором, используемой для выращивания культур клеток);
5) феномену гемадсорбции (способности клеточных культур, зараженных вирусом, адсорбировать на своей поверхности эритроциты. Многие вирусы обладают гемадсорбирующими свойствами. Механизмы гемадсорбции и гемагглютинации сходны).

Индикация вирусов

бляшкам. В том месте бактериального газона, куда попал бактериофаг, образуется

стерильное пятно или бляшка - зона лизиса бактерий, вследствие размножения бактериофага. Количество образовавшихся негативных колоний бактериофага соответствует количеству бактериофагов.

Количественный учёт вирусов

Образуемая фагом бляшка может содержать 107 -109 вирионов и может служить источником чистой линии фага. Размер бляшек зависит от размера вирионов фага, а также от скорости репликации фага, скорости освобождения вирионов фага из клеток и их адсорбции на поверхности новой, незаражённой бактериальной клетки. Морфология бляшки обычно характерна для данного фага.
При волнообразном изменении скорости роста бактерий возможно появление кольцеобразных бляшек. Образование ферментов, обладающих способностью атаковать капсулу бактерий, может привести к возникновению ореолов вокруг бляшек.

Фаг лямбда

во всех случаях начинается с адсорбции вирионов на рецепторах клеточного

организма. Однако дальнейшее течение данного процесса может происходить по-разному, в зависимости от сопутствующих условий.
Известны три основных типа взаимодействия вируса с клеткой:
продуктивный тип, завершающийся образованием многочисленного потомства - новых вирусных частиц;
абортивный тип, когда репродукции вирусов не происходит, поскольку инфекционный процесс прерывается на одном из этапов взаимодействия с клеткой;
интегративный тип, или вирогения, характеризующийся встраиванием вирусной нуклеиновой кислоты в хромосому клетки хозяина.

Взаимодействие вируса с клеткой хозЯина

хозяине
Проникновение вирионов в клетку
«Раздевание» вирионов в клетке
Биосинтез вирусных

компонентов в клетке

Формирование (сборка) вирусных частиц

Выход вирусного потомства из клетки

реактивациями процесса. В случае ретровирусов латентные инфекции могут вызывать трансформацию

клеток и индуцировать начало злокачественного роста.

Интегративный тип взаимодействия вируса с клеткой - интеграция вирусной нуклеиновой кислоты в клеточный геном (вирогения)

Нуклеиновая кислота вируса встраивается в хромосому клетки. При этом вирусный геном реплицируется и функционирует как составная часть клеточного генома. Характерен для определенных групп вирусов: онкогенных (опухолеродных) вирусов, бактериофагов, вирусов герпеса, гепатита, аденовирусов, ВИЧ и др.

несколько гипотез, объясняющих происхождение вирусов. Считается, что крупные ДНК-содержащие вирусы

происходят от более сложных (и, возможно, клеточных, организмов, таких как современные микоплазмы и риккетсии), внутриклеточных паразитов, утративших значительную часть своего генома. Некоторые вирусные белки не обнаруживают никакой гомологии с белками бактерий, архей и эукариот, что свидетельствует о сравнительно давнем обособлении этой группы. ДНК-содержащие бактериофаги и некоторые ДНК-содержащие вирусы эукариот, возможно, происходят от мобильных элементов — участков ДНК, способных к самостоятельной репликации

Вирус папиломы

Вирус гриппа H1N1

Вирус оспы

Происхождение некоторых РНК-содержащих вирусов связывают с вироидами. Известны примеры вирусов, содержащих выраженные вироидподобные участки (вирус гепатита Дельта).

Тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК);
Структура нуклеиновой кислоты (количество нитей,

процентное содержание в вирионе, особенности воспроизводства вирусного генома);
Размеры и морфология вирионов, количество капсомеров и тип симметрии;
Наличие суперкапсида;
Особенности репродукции в клетке хозяина;
Антигенные свойства;
Чувствительность к отдельным химическим соединениям (эфиру, дезоксихолату).

Царство Vira подразделено по типу нуклеиновой кислоты на два подцарства или класса - рибовирусы (РНК-содержащие вирусы) и дезоксирибовирусы (ДНК-содержащие вирусы). Следующие таксономические категории: семейство, подсемейство, род. Названия родов и особенно подсемейств сформулированы не для всех вирусов.

Номенклатура Вирусы обычно называют в соответствии с вызываемыми заболеваниями (например, вирус герпеса) либо по названию места, где они были впервые выделены (например, вирусы Коксаки, вирус Норволк). Реже используются фамилии учёных, впервые их выделевших (Эпстайна - Барр), либо название отражает их уникальные эпидемиологические характеристики (например, арбовирусы).

инфекционных заболеваний человека и животных: гриппозные инфекции, корь, бешенство, различные

типы гепатитов, ящур, ветрянку, СПИД и десятки других. Вирусы активно участвуют в процессах канцерогенеза, могут передаваться человеку разными путями: контактным, аэрогеным, алиментарным, трансмиссивным, а также через плаценту от матери к плоду.

Фитопатогенные вирусы (вирусы растительных клеток) вызывают у растений множество заболеваний. Эти вирусы попадают внутрь растительных клеток через повреждения, а не в результате активного внедрения. В естественных условиях распространение многих вирусов происходит путем прямого контакта растений или через переносчиков. Переносчиками многих вирусов служат насекомые.

РНК с помощью фермента обратной транскриптазы синтезируется ДНК, которая встраивается

в хромосому хозяина. Таким образом ДНК вирусов (провирус), встроившаяся в хромосому, может приводить к превращению здоровой клетки в раковую. Для возникновения рака существенен не весь геном вируса, а лишь один из его генов. Такой ген, вызывающий рак, назвали онкогеном. Онкогенные вирусы отличаются тем, что, внедряясь в ДНК, не разрушают клетку, а заставляют её бесконтрольно делится.

Пролиферация клеток фибробластов, инфицированных вирусом герпеса

что не сопровождается гибелью клетки, иногда они протекают без клинических

проявлений. В частности, вирусы гепатита В и С способны вызывать персистирующие поражения с развитием хронического гепатита и часто опухолей печени.

Природный резервуар вируса неизвестен, но установлено, что кроме человека гепатитом С болеют только шимпанзе. Предполагается, что вирус гепатита С проник в популяцию человека около 300 лет назад, но резкий подъём заболеваемости пришёлся на конец XX века. Вирус гепатита С передаётся только через кровь.

вирус ВИЧ был выделен Монтанье и Галло в США в

1983 г. Ретроспективный анализ сывороток, хранящихся в Национальном Центре контроля за инфекционными заболеваниями (США) показал, что первые случаи СПИДа у человека относятся к 50 годам ХХ века, и что заболевание возникло в Африке и затем распространилось по странам Европы и США. Вирус ВИЧ поражает клетки иммунной системы и ведёт к резкому снижению защитных сил организма. Больные СПИДом погибают от вторичных инфекций, вызываемых микроорганизмами непатогенными для людей с нормальным иммунитетом, или от злокачественных новообразований.

Больной СПИДом

Вирус иммунодефицита человека

Синдром приобретённого иммунодифицита

трёхмерной структурой, способен прямо катализировать структурное превращение гомологичного ему нормального

клеточного белка в себе подобный (прионный), присоединяясь к белку-мишени и изменяя его конформацию. Имеет вид фибрилл толщиной 10-20 и длиной 100-200 нм. Прионы вызывают у человека и животных энцефалопатии в условиях вяло текущей инфекции. Прионовые белки выделены как инфекционное начало скрэпи, куру, спонгиоформной энцефалопатии КРС (коровье бешенство).

Зелёное флуоресцентное свечение обусловлено прионными белками коровьего бешенства в коре мозжечка лабораторных мышей

благодаря эпидемии трансмиссивной спонгиозной энцефалопатии коров (бешенство коров) в Англии.

Аналогичное заболевание - куру, возникающее в результате употребления мозга умерших соплеменников во время ритуального каннибализма, регистрируется в одном из племен Папуа-Новой Гвинеи. Куру, болезнь Кройтцфельдта-Якоба, синдром Герстмана-Страусслера-Шайнкера, болезнь Альцгеймера – медленные прионные инфекции ЦНС. Из-за длительного инкубационного периода ими болеют в основном пожилые люди. Они объединены в группу старческих энцефалопатий. Смертность от медленных инфекций 100%.

Гистологический срез ткани мозга при губчатой энцефалопатии

Прионные частицы в ткани мозга при болезни Альцгеймера

Они состоят из однонитевой молекулы РНК, лишены белковой оболочки, автономно

реплицируются в зараженных клетках. Считается, что вироиды представляют собой «сбежавшие интроны» — вырезанные в ходе сплайсинга незначащие участки мРНК, которые случайно приобрели способность к репликации. Белков вироиды не кодируют. Вироиды - возбудители опасных болезней. Один из них стал причиной гибели миллионов кокосовых пальм на Филиппинах за последние пятьдесят лет. Наиболее изученным вироидом является агент PSTV, вызывающий веретёновидность клубней картофеля.

РНК-молекула вироида PSTV

Веретёновидность клубней

Пятнистость листьев хризантем

Растрескивание плодов у яблони

Вироиды

сперматозоида. Они состоят из головки, которая содержит нуклеиновую кислоту, и

отростка. У некоторых фагов отросток очень короткий или полностью отсутствует. Размеры фагов колеблются в среднем от 20 до 200 нм. Средний диаметр головки равен 70-100 нм, длина отростка составляет 80-200 нм.

Химический состав фагов определяется в основном наличием нуклеиновой кислоты и белка. Большинство из них содержат двунитевую ДНК, которая замкнута в кольцо. Некоторые фаги содержат РНК. В частицах некоторых фагов под чехлом дистальной части отростка содержится фермент лизоцим

клеткой
Вирулентные фаги, проникнув в бактериальную клетку, автономно репродуцируются в

ней и вызывают лизис бактерий. Процесс взаимодействия с бактериями сходен с процессом продуктивного типа взаимодействия вирусов с клеткой. По специфичности действия с бактериальной клеткой различают: поливалентные фаги, способные взаимодействовать с родственными видами бактерий; моновалентные фаги, взаимодействующие с бактериями определенного вида; типовые фаги, лизирующие отдельные варианты (типы) данного вида бактерий.
Умеренные фаги инфицируют клетку, не вызывая ее лизиса. ДНК бактериофага интегрирует с ее генетическим аппаратом и реплицируется синхронно (передается по наследству). Фаговая ДНК встроенная в геном бактерии носит название профага. Бактериальные клетки, содержащие профаг, называются лизогенными, культура бактерий, содержащая профаг, называется лизогенной, а само явление - лизогенией.
Спонтанно лизогенные бактерии лизируются редко. Феномен активации продукции фагов лизогенными клетками под влиянием химических соединений или физических факторов назван индукцией профага. Лизогенные бактерии невосприимчивы к заражению теми фагами, которые присутствуют в них в виде профага.
Изменение свойств микроорганизма под влиянием профага получило название фаговой конверсии. Способность дифтерийной палочки образовывать экзотоксин связана с наличием профага в клетке.

изучения тонкой структуры гена. Система «фаг — бактериальная клетка» является

идеальным объектом для изучения взаимоотношений вируса и клетки, в частности процессов онкогенеза.
Умеренные фаги используют в биотехнологии и генетической инженерии в качестве векторов для получения рекомбинантной ДНК и штаммов микроорганизмов с практически полезными свойствами и характеристиками. Они являются мощным фактором изменчивости микроорганизмов.
Фаги применяют для идентификации возбудителей инфекционных заболеваний. Вследствие высокой специфичности фагов можно определить вид возбудителя или варианты внутри вида.
Фаги применяют для лечения и профилактики инфекционных болезней. В России налажено производство стафилококкового, стрептококкового, дизентерийного, протейного, синегнойного, брюшнотифозного, сальмонеллезных и других фагов.
 

Вирусология. СПб.6 Изд-во СПбГУ, 2007. 257 с.
Домарадский И.В. Основы вирусологии

для экологов/ Под. Ред. В.Л. Алёшкина. М: ЛексЭст, 2007. 80 с.
Филдс Б., Найп Д. (Ред.) Вирусология, Т 1. - Москва, Мир. 1989, 494 с.
Баррет Т., Берд П., Клегг Дж. Вирусология. Методы. /Под ред. Мейхи Б.М: Мир, 1988.
Современная микробиология. Прокариоты (в 2-х тт.). – М.: Мир, 2005. Т.2 – 449 с.

бытовыми и сельскохозяйственными стоками, шламами и твёрдыми отходами. Концентрация вирусов

в неочищенных стоках в среднем составляет 104 инфекционных единиц на литр. Патогенные для человека вирусы в хорошо увлажнённой почве переживают не менее 11, а зимой более 170 дней. Они могут встречаться в овощах и накапливаться в почве.
Дефицит влаги отрицательно сказывается на персистенции вирусов. Постоянное промачивание значительно ускоряет вертикальную миграцию. Вирусы устойчивы к прямому воздействию видимого света.

Под воздействием ветра на водных поверхностях образуются аэрозоли, в которых концентрация вирусов повышается в 10-100 раз.