Слайд 1Обнаружение лекарственных средств в окрашенных волосах для целей химико-токсикологического анализа
Родионова
Д.Ю.
(научный руководитель –Стрелова О.Ю., к.х.н., доцент)
ФГБОУ ВО Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая
академия,
кафедра фармацевтической химии
Химико-токсикологической лаборатория СПб ГБУЗ МНД-1
Центр экспериментальной фармакологии
Слайд 2Актуальность
По данным Совета Безопасности РФ общее число наркозависимых граждан
России составляет 640 тысяч человек.
Но нелегальный оборот наркотических веществ является
лишь частью проблемы. На сегодняшний день люди всё чаще умышленно употребляют лекарственные средства в немедицинских целях. Как пример – димедрол и производные барбитуровой кислоты.
Согласно исследованиям, более 50% людей в возрасте от 20 лет изменяют цвет волос с помощью косметических средств, из них 17% женщин настолько долго окрашивают волосы, что даже не помнят их натуральный оттенок (Dailymail, 2013).
Данные обстоятельства требуют разработки и внедрения в практику новых методов анализа биологических объектов.
Слайд 3Цели и задачи
Целью работы является разработка методики обнаружения с помощью
ферментативного гидролиза токсических веществ, на примере производных барбитуровой кислоты и
димедрола, в окрашенных волосах как объекте химико-токсикологического исследования.
Задачи:
Обзор литературных данных по вопросам накопления веществ в природно и искусственно окрашенных волосах, характеристики различных искусственных красителей для волос и этапов пробоподготовки волос.
Определение фонового уровня эндогенных веществ на хроматограммах после проведения кислотного, щелочного и ферментативного гидролиза окрашенных волос.
Создание модели длительного приема производного пиримидина (фенобарбитала), а также димедрола с участием экспериментальных животных (припродно окрашенные морские свинки).
Разработка методики ферментативного гидролиза окрашенной шерсти экспериментальных животных с целью выделения токсических веществ.
Статистическая обработка полученных данных и валидация методики.
Слайд 4Волосы как объект ХТА
А - аккумуляция наркотических веществ за 1
месяц
Б - аккумуляция наркотических веществ за 2 месяца
В - аккумуляция
наркотических веществ за 3 месяца
Г- аккумуляция наркотических веществ в волосе человека, который употреблял препараты хотя бы один раз в течение второго месяца, но не употреблял в течении первого и третьего месяца
Слайд 5Меланин и цвет волос
Натуральный цвет волос обусловлен гранулами с пигментом
меланином, который делят на два класса: эумеланин (выделяют подклассы –
черный и коричневый) и феомеланин (от желтого до красного).
Огромное разнообразие оттенков волосяного покрова головы людей и цвета шерсти/перьев животных определяется различным количественным соотношением эумеланина и феомеланина.
Слайд 6Меланин и ксенобиотики
Исследования на животных, описанные в литературе, показали, что
концентрация ксенобиотиков в волосах зависит от степени их пигментации. Наибольшее
количество инкорпорированных веществ было отмечено в черных волосах, затем в каштановых и в наименьшей степени в светлых.
Это можно объяснить наличием определенной аффиности токсикантов к меланину, а также фактом того, что меланин обусловливает кислый рН волос, стимулируя переход ксенобиотиков из плазмы крови в клетки фолликула.
Слайд 7Искусственное окрашивание волос
На сегодняшний день косметические продукты могут убрать («поднять»)
естественный цвет волос, добавить дополнительный оттенок к натуральному или могут
сочетать обе эти функции.
Выделяют несколько уровней средств для окрашивания волос по стойкости:
Временные краски для волос или оттеночные шампуни/бальзамы (уровень о)
Семиперманентные краски (уровень 1)
Демиперпанентные красители (уровень 2)
Перманентные краски (уровень 3)
Слайд 8Фоновые хроматограммы натуральных волос
Черная шерсть
Рыжая шерсть
Слайд 9Фоновая хроматограмма обесцвеченных волос
Обесцвеченная шерсть
Слайд 12Методика щелочного гидролиза натуральных черных волос в целях изолирования димедрола
Слайд 13Методика кислотного гидролиза натуральных черных волос в целях изолирования фенобарбитала
Слайд 14Методика ферментативного гидролиза с помощью химотрипсина
Слайд 15Проведение газовой хроматографии с масс-селективным детектором
Слайд 16Хроматограмма и масс-спектр образцов после щелочного гидролиза (димедрол)
Слайд 17Хроматограмма и масс-спектр образцов после ферментативного гидролиза (димедрол)
Слайд 18Статистическая обработка данных по степени экстракции
димедрола из шерсти морских
свинок черной природной окраски методом прямой экстракции хлороформом после щелочного
и ферментативного гидролиза (ГФ XIII).
Слайд 19Хроматограмма и масс-спектр образцов после кислотного гидролиза (фенобарбитал)
Слайд 20Хроматограмма и масс-спектр образцов после ферментативного гидролиза (фенобарбитал)
Слайд 21Статистическая обработка данных по степени экстракции
фенобарбитала из шерсти морских
свинок черной природной окраски методом прямой экстракции хлороформом после кислотного
и ферментативного гидролиза (ГФ XIII).
Слайд 22Сравнение результатов гидролиза природной белой и черной шерсти
Димедрол
Фенобарбитал
Слайд 23Валидация метода ферментативного гидролиза
Слайд 24Заключение
Показано, что фоновый уровень эндогенных веществ в природно окрашенных и
неокрашенных волосах не влияет на интерпретацию результатов.
Пробы искусственно осветленных волос
после ферментативного гидролиза получаются чище. Работа по их анализу продолжается.
Экспериментально проверено, что ферментативный гидролиз может быть использован на природно окрашенных в черный цвет волосах, полученные результаты сопоставимы с природно неокрашенными волосами.
Разработана и валидирована методика ферментативного гидролиза для натуральных черных волос на примере фенобарбитала и димедрола.
