Слайд 1МИКРОБНЫЙ ФАКТОР В ЭТИОЛОГИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПАРОДОНТА И СТРАТЕГИЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОЙ ТЕРАПИИ
профессор
В.Н. ЦАРЁВ
Москва 2006
Слайд 2Распространенность воспалительных заболеваний пародонта в нашей стране достигает
95 – 100
%
Наиболее часто встречающиеся воспалительные заболевания зубо-челюстной системы связаны с инфицированием
микробной флорой.
Слайд 3
В современных условиях вследствие отрицательного влияния экологических и социальных факторов,
ведущих к снижению реактивности организма пациентов, проблема диагностики и лечения
этих заболеваний, особенно в России, начиная с 90-х годов, стоит особенно остро.
Слайд 4
Микрофлора зубного налета и слизистой оболочки полости рта при сканирующей
микроскопии
L. Flores-De-Jakoby, L. Tsalitis, 1996
Слайд 5Окружающая среда
Питательные вещества
Биоплёнка
Иммунная
реактивность
Неспецифич.
защита
Нормофлора
слюны
Секреторные молекулы
организма
Слайд 6
Р.В.Ушаков, В.Н. Царев. Стоматология для всех №3 - 1998
Слайд 7Микробиоценоз и его нарушения
Норма
Кариес Пародонтит
Слайд 8Длительное воспаление
Разрушение тканей десны и альвеолярного отростка
Кровоточивость
Нарушение сосудистой микроциркуляции крови
в тканях десен
Дистрофические изменения
Рассасывание костной основы
Выпадение зубов
Факторы вирулентности
Слайд 9Повреждение тканей пародонта
Слайд 10Основные пародонтопатогены из группы бесспоровых анаэробов:
Actinobacillus actinomycetemcomitans
Bacteroides forsithus
Porphyromonas gingivalis
Prevotella intermedia
Treponema
denticola
Слайд 11Микроскопия препарата из чистой культуры Porphyromonas gingivalis
Слайд 12Мазок из чистой культуры бактероидов Вacteroides forsithus
Слайд 13Превотеллы на кровяном агаре
Рост пигментообразующих видов
на кровяном агаре
Слайд 14Микроскопия препарата из чистой культуры Fusobacterium nucleatum
Слайд 15Микроскопия препарата из чистой культуры Fusobacterium mortiferum
Слайд 16Фузобактерии на селективной среде
Слайд 17Микроскопия препарата из чистой культуры Peptostreptococcus spp.
Слайд 18Альфа-гемолитические стрептококки
S. sanguis на кровяном агаре
Слайд 19Микроскопия препарата из чистой культуры Аctinomyces israelii
Слайд 20Виды актинономицетов:
Israelii
A. naeslundii
viscosus
A. odontolyticus
pyogenes
A. bovis
Слайд 21Рост чистой культуры Actinomyces israeli
Слайд 22Методы микробиологической диагностики
Микроскопический (включая биоптаты)
Бактериологический (анаэробиоз)
Серологический (ИФА, РИФ)
Биологический (выявление экзотоксина)
Молекулярно-генетический
(ПЦР)
Слайд 23Взятие материала для исследования:
а) тампоном; б) гладилкой; в) адсорбером
Слайд 24Микроскопический метод: преобладание грам-отрицательной флоры – неблагоприятный показатель состояния тканей
пародонта
Грам-отрицательные спиралевидные бактерии, анаэробы-микроаэрофилы
Слайд 25Алгоритм бактериологического исследования с применением анаэробного культивирования:
1-получение изолированных колоний в
условиях анаэробиоза на 5% гемин-агаре
2-идентификация чистых культур по морфологическим, культуральным
и биохимическим свойствам
3-чувствительность
к антибиотикам
Слайд 26Транспорт исследуемого
материала - бак. метод
Соблюдение правил взятия исследуемого материла.
Предотвращение контаминации образца. Уменьшение доступа кислорода.
Использование транспортных систем и сред
тормозящих активную жизнедеятельность анаэробных видов бактерий (тиогликолевая среда, среда Стюарта, Среда Эймса и т.п.).
Доставка материала в ближайшие часы после взятия пробы, охлаждение при 4С до посева.
Слайд 27Трудности выявления пародонтопатогенной флоры:
Необходимость и длительность анаэробного культивирования (5 суток)
Высокая
требовательность к составу питательных сред
Отсутствие методов идентификации, доступных для клинических
лабораторий
Внутриклеточная локализация порфиромонад, превотелл, актинобацилл, хламидий
Слайд 28Язвенно-некротический гингивостоматит
T. vincentii
T. denticola
+
Fusobacterium
Синергизм
патогенного
действия
Слайд 29Способность к внутриклеточному паразитизму способствует персистенции возбудителей в условиях антибиотикотерапии:
Porphyromonas gingivalis в десневом эпителии
Слайд 30Современная диагностика:
ИФА (антитела)
ПЦР (генетич.
маркеры)
Слайд 32Micro DentR (Hain Diagnostica, Германия)
Слайд 33Забор пробы материала для постановки ПЦР с помощью тест-систем МультиДент
(Россия) и МикроДент (Германия)
Тест – система “Мультидент”
(НПФ “ГЕНТЕХ”)
позволяет одновременно идентифицировать ДНК пяти основных пародонтопатогенных бактерий с помощью ПЦР
К+ К+
1 2 3
P.i. (1000 п.н.)
B.f. (700 п.н.)
T.d. (512 п.н.)
A.a. (360 п.н.)
P.g. (197 п.н.)
старт
финиш
Детекция продуктов амплификации методом гельэлектрофореза
Слайд 41Выявление Actinobacillus actinomycetemcomitans
бактериологическим методом при положительной ПЦР в тест-системе MicroDent
36 %
Слайд 42Выявление Prevotella intermedia бактериологическим методом при положительных результатах ПЦР в
системе MicroDent
55 %
Слайд 43
Выявление Porphyromonas gingivalis
бактериологическим методом при положительной ПЦР в MicroDent
64
Слайд 4458,3%
52,7%
Только молекулярно-генетическим методом
(ПЦР) выявляются:
Слайд 46 Результаты молекулярно-биологических методов зависят от:
условий забора исследуемого
материала,
времени выдержки бумажного штифта в пародонтальном кармане,
количества проб, взятого из
одного кармана,
условий пробоподготовки,
способа экстракции нуклеиновых кислот,
режима репликации ДНК,
детекции продуктов реакции.
Слайд 49Кандида-ассоциированный пародонтит и кандидозный стоматит – проявления иммунодефицитных состояний
Гипертрофический или
атрофический кандидоз, быстро прогрессирующий и распространяющийся на другие органы
(у 40-50% ВИЧ-инфицированных)
Слайд 50Вирусы простого герпеса
ВПГ-1 и ВПГ-2 (урогенитальный)
Активация ВПГ происходит в
условиях ИД у 5-20% пациентов
Слайд 51Вирус Эпштейна-Барр (ВПГ-4)
Бородавчатая лейкоплакия- «волосатый» язык у 80%
Предвестник за 7-30
мес. до постановки диагноза СПИД
Слайд 52Патогенетические механизмы опосредованные вирусами
Представители группы ВПГ блокируют процесс представления антигена
молекулами HLA I и II классов, литическое действие NK-клеток, CD8+-
Т-лимфоцитов и цитокиновую модуляцию, активируют продукцию макрофагами ИЛ-2/бета и ОНФ, синергично с пародонтопатогенными видами бактерий
Слайд 53Цитомегаловирус и вирус герпеса
Изъязвления в ротовой полости у иммунокомпроментированных людей
часто могут быть связаны с ЦМВ.
У 53 % ВИЧ
– инфицированных пациентов изъязвления связаны с ЦМВ и у еще у 28 % - со смешанной ЦМВ и ВПГ инфекцией.
Иногда в эти процессы вовлекаются ткани десны и пародонта с последующей деструкцией кости и развитием остеомиелита [Contreras A., Slots J., 2000].
Слайд 54
Сравнительная частота выявления вирусов в пародонтальном кармане больных ХГП и
людей со здоровым пародонтом, %.
Слайд 55
Результаты ПЦР-выявления ДНК
цитомегаловируса
К-, К+ - отрицательный и положительный контроли этапа амплификации.
1 – 8 – исследуемые пробы.
В образцах 1,3-7 ДНК Human cytomegalovirus не обнаружена. В образце 2 ДНК обнаружена в низкой концентрации, в образце 8 – в высокой концентрации.
Слайд 56Зависимость выявления вирусов от глубины пародонтального кармана
HSV1HSV2CMVEBV< 3 мм5,56001,414,2 мм13,92,948,35,95,2
мм19,87,613,7520,36,7 мм12,862,942,9814,03
Слайд 57РЕЗЮМЕ
ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИТЕЛ С ПОМОЩЬЮ ИФА В КРОВИ отмечается С БОЛЬШЕЙ
ЧАСТОТОЙ, ЧЕМ ДНК С ПОМОЩЬЮ ПЦР, ЧТО МОЖЕТ ГОВОРИТЬ О
НАЛИЧИИ ЛАТЕНТНОЙ ИНФЕКЦИИ или ПЕРЕНЕСЕННОМ РАНЕЕ ЗАБОЛЕВАНИИ, НО НЕ УКАЗЫВАЕТ НА ЛОКАЛИЗАЦИЮ ИНФИЦИРУЮЩЕГО АГЕНТА.
ПОЭТОМУ, ДЛЯ ПРЯМОГО КАЧЕСТВЕННОГО ИЛИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОБНАРУЖЕНИЯ ДНК ВОЗБУДИТЕЛЯ В ИССЛЕДУЕМОМ МАТЕРИАЛЕ, ПОВЫШЕНИЯ КАЧЕСТВА И СОКРАЩЕНИЯ СРОКОВ ДИАГНОСТИКИ, КОНТРОЛЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕРАПИИ МОЖНО РЕКОМЕНДОВАТЬ ПЦР-ДИАГНОСТИКУ.
Слайд 59Алгоритмы микробиологических исследований
ПЦР-диагностика + антибиотикограмма:
Выявления вида пародонтопатогена
Оценка его чувствительности к
антибиотику
Контроль эффективности лечения
2. ИФА (антитела) на вирусы, хламидии и
грибы + иммунный статус
Выявление вирусных и иных агентов, развивающихся на фоне иммунодефицитов
Подбор препаратов для лечения иммунодефицитов
Диагностика кандидоза + чувствительность грибов к фунгицидным препаратам
Выявление дисбактериоза и кандидоза полости рта
Подбор фунгицидных препаратов новых групп
Слайд 60Наилучший терапевтический эффект и эффект санации
достигается при механическом удалении зубного
налета и
комплексной
антимикробной терапии
Слайд 61Определение чувствительности анаэробов крайне трудоёмко:
1) метод дисков
Слайд 622) Кассетный микрометод (1991 г) Основные группы антибиотиков, эффективных в
отношении вирулентной микробной флоры полости рта
линкосамиды (линкомицин, клиндамицин);
макролиды (рокситромицин,
спирамицин, кларитромицин, мидекамицин);
производные имидазола (метронидазол, нитазол, тинидазол) в комбинации с бета-лактамами
Слайд 63Динамика количества резистентных штаммов
анаэробных бактерий (в %) за 1985-2003 гг.
по данным кафедры микробиологии МГМСУ
Слайд 64КЛЮЧ ДЛЯ НАЗНАЧЕНИЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ЛЕЧЕНИЯ
Слайд 65Чувствительность штаммов пародонтопатогенных бактерий
к препаратам основных групп
Рокситромицин (рулид) Спирамицин
(ровамицин) Кларитромицин (клацид) 94-100%
Доксициклин
Метациклин 80-90%
Клиндамицин
(далацин С) Линкомицин 60-80%
Амоксициллин 50-80%
Метронидазол (трихопол) 50-60%
Плахий Л.Я. Дисс. д-ра мед.наук. – М., 2002.
Слайд 68Цефтриабол - цефалоспориновый антибиотик
3 поколения (цефтриаксон),
производство АболМед (Россия)
Слайд 70Основные группы антибиотиков, эффективных в отношении вирулентной микробной флоры полости
рта
тетрациклины (доксициклин, метациклин)
другие антибиотики широкого спектра действия, преимущественно для
местного применения (левомицетин, грамицидин С).
*** Аминогликозиды (гентамицин) противопоказаны за исключением микробиологически подтверждённых случаев инфекции, вызванной синегнойной и др. грам-отрицательным палочками аэробной или факультативно-аэробной группы, золотистым стафилококком или энтерококком
Царёв В.Н., Чувилкин В.И., Трефилов А. Г. Стоматология для всех. – 2001.
Слайд 72Дозировка антибиотиков для однократного введения с целью периоперационной профилактики при
некоторых видах хирургических вмешательств: Лоскутные операции и пластика при пародонтитах,
дентальная имплантация, синуслифтинг, коррекция альвеолярного отростка, удаление ретенированных зубов, углубление преддверья полости рта
Рокситромицин 150 мг за 40-60 минут до операции ;
Кларитромицин по 500 в/м или внутривенно, за 30 минут до операции ;
Спирамицин 1,5 млн. ЕД в/м или внутривенно за 30 минут до операции ;
Цефазолин 1-2 г. в/в за 30 минут до операции;
Цефуроксим 750 мг за 30 минут до операции в/в или в/м;
Ципрофлоксацин 0,2 г за 40 минут до операции, в/в;
Клиндамицин 600-900 мг в/в за 30 минут до операции;
Линкомицин 0,6-1,5 г за 30 минут до операции в/м.
Слайд 73Антисептики на основе хлоргексидина и гексетидина
Слайд 74ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ЛАБОРАТОРИИ :
Лаборатория молекулярно-биологических исследований НИМСИ МГМСУ
Долгоруковская, д.4,
4 этаж
(забор материалов курьером)