Слайд 1НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ.
(Отработка)
студентки группы С-105
Юсуповой Дианы
Руководитель
Елена Михайловна
Слайд 2Открытие нуклеиновых кислот связано с именем молодого врача из города Базеля
(Швейцария) Фридриха Мишера. После окончания медицинского факультета Мишер был послан
для усовершенствования и работы над диссертацией в Тюбинген (Германия) в физиолого-химическую лабораторию, возглавляемую Ф. Гоппе-Зейлером. Тюбингенская лаборатория в то время была известна ученому миру. Пройдя практику по органической химии, Мишер приступил к работе в биохимической лаборатории. Ему было поручено заняться изучением химического состава гноя. Молодой ученый не возражал против предложенной темы, так как считал лейкоциты, присутствующие в гное, одними из самых простых клеток.
Слайд 3Нуклеиновые кислоты в природе встречаются во всех живых клетках. Живые
клетки, за исключением сперматозоидов, в норме содержат значительно больше рибонуклеиновой,
чем дезоксирибонуклеиновой кислоты.
На методы выделения дезоксирибонуклеиновых кислот оказало большое влияние то обстоятельство, что, тогда как рибонуклеопротеиды и рибонуклеиновые кислоты растворимы в разбавленном (0,15 М) растворе хлористого натрия, дезоксирибонуклеопротеидные комплексы фактически в нем нерастворимы.
Поэтому гомогенизированный орган или организм тщательно промывают разбавленным солевым раствором, из остатка с помощью крепкого солевого раствора экстрагируют дезоксирибонуклеиновую кислоту, которую осаждают затем добавлением этанола.
Слайд 4В клетках эукариот (например, животных или растений) ДНК находится в
ядре клетки в составе хромосом, а также в некоторых клеточных
органоидах (митохондриях и пластидах). В клетках прокариотических организмов (бактерий и архей) кольцевая или линейная молекула ДНК, так называемый нуклеотид, прикреплена изнутри к клеточной мембране. У них и у низших эукариот (например, дрожжей) встречаются также небольшие автономные, преимущественно кольцевые молекулы ДНК, называемые плазмидами. Кроме того, одно- или двухцепочечные молекулы ДНК могут образовывать геном ДНК-содержащих вирусов.
Слайд 5ПОЛУЧЕНИЕ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
В клетках нуклеиновые кислоты связаны с белками, образуя
нуклеопротеиды. Выделение нуклеиновых кислот сводится к очистке их от белков.
Для этого препараты, содержащие нуклеиновые кислоты, обрабатывают ПАВ и экстрагируют белки фенолом. Послед, очистка и фракционирование нуклеиновых кислот проводятся с помощью ультрацентрифугирования, различных видов жидкостной хроматографии и гель - электрофореза. Для получения индивидуальных нуклеиновых кислот обычно используют различные варианты последнего метода.
Современные методы химического синтеза нуклеиновых кислот позволяют получать крупные фрагменты ДНК, в том числе целые гены. Методические основы химически - ферментативных методов синтеза ДНК разработаны X. Кораной.
Слайд 6Они включают:
химический синтез комплементарных, взаимоперекрывающихся олигонуклеотидов, из которых затем в
результате комплементационных взаимодействий выстраиваются дуплексы - фрагменты молекулы синтезируемой ДНК
с несовпадающими разрывами в обеих цепях;
соединение (лигирование) таких олигонуклеотидов в составе дуплекса с помощью фермента Т4 ДНК-лигазы. Сборку протяженных ДНК из синтетически однотяжевых олигонуклеотидов проводят в несколько этапов. Сначала собирают небольшие дуплексы с "липкими" концами (однотяжевыми комплементарными участками), из которых затем последовательно формируют более протяженные структуры. Таким образом могут быть получены искусственные фрагменты ДНК большой длины и с любой нуклеотидной последовательностью. С помощью генетической инженерии возможно клонирование (получение в индивидуальном виде и размножение) искусственных ДНК.
Слайд 7Стандартность операций в твердофазном синтезе олигонуклеотидов явилась основой для автоматизации
процесса.
Принцип работы автомата-синтезатора основан на подаче в реактор с
помощью насоса (под контролем микропроцессора) защищенных нуклеотидных компонентов реагентов и растворителей по заданной программе в колонку, содержащую полимерный носитель с закрепленным на нем первым нуклеозидом. После окончания синтеза и отделения полностью защищенного олигонуклеотида от полимерного носителя проводят деблокирование, очистку и анализ синтезированных фрагментов ДНК. Так, с помощью гидрофосфорильного метода в автомате - синтезаторе за несколько часов получают 30-40-звенные олигонуклеотиды; возможен синтез более чем 100-звенных фрагментов ДНК. Разработаны синтезаторы, позволяющие проводить одновременно синтез несколько олигонуклеотидов.
Слайд 8ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ
Нуклеиновые кислоты:
хорошо растворимы в воде
практически не растворимы в
органических растворителях.
очень чувствительны к действию температуры и критических значений уровня
pH.
молекулы ДНК с высокой молекулярной массой, выделенные из природных источников, способны фрагментироваться под действием механических сил, например при перемешивании раствора.
нуклеиновые кислоты фрагментируются ферментами -- нуклеазами.
Слайд 9Химические свойства РНК.
Напоминают свойства ДНК, однако наличие дополнительных групп ОН
в рибозе и меньшее (в сравнении с ДНК) содержание стабилизированных
спиральных участков делает молекулы РНК химически более уязвимыми. При действии кислот или щелочей основные фрагменты полимерной цепи Р(О)-О-СН2 легко гидролизуются, группировки А, У, Г и Ц отщепляются легче. Если нужно получить мономерные фрагменты, сохранив при этом химически связанные гетероциклы, используют деликатно действующие ферменты, называемые рибонкулеазами
Слайд 10Химические свойства ДНК
В воде ДНК образует вязкие растворы, при нагревании
таких растворов до 60°С или при действии щелочей двойная спираль
распадается на две составляющие цепи, которые вновь могут объединиться, если вернуться к исходным условиям. В слабокислых условиях происходит гидролиз, в результате частично расщепляются фрагменты - Р-О-СН2- с образованием фрагментов - Р-ОН и НО-СН2 , соответственно результате образуются мономерные, димерные (сдвоенные) или примерные (утроенные) кислоты, представляющие собой звенья, из которых была собрана цепь ДНК.
Участие ДНК и РНК в синтезе белков - одна из основных функций нуклеиновых кислот. Белки - важнейшие компоненты каждого живого организма. Мышцы, внутренние органы, костная ткань, кожный и волосяной покров млекопитающих состоят из белков. Это полимерные соединения, которые собираются в живом организме из различных аминокислот. В такой сборке управляющую роль играют нуклеиновые кислоты, процесс проходит в две стадии, причем на каждой из них определяющий фактор - взаимоориентация азотсодержащих гетероциклов ДНК и РНК.
Основная задача ДНК - хранить записанную информацию и предоставлять в тот момент, когда начинается синтез белков. В связи с этим понятна повышенная химическая устойчивость ДНК в сравнении с РНК.
Природа позаботилась о том, чтобы сохранить по возможности основную информацию неприкосновенной.