Слайд 1ЗППП 2
Кафедра микробиологии и вирусологии
Слайд 2Сифилис
Сифилис – антропонозное венерическое заболевание с длительным рецидивирующим течением,
в ходе которого происходит смена нескольких периодов с разными клиническими
проявлениями.
При сифилисе могут поражаться практически все системы и органы.
Слайд 3Таксономическое положение возбудителя сифилиса
Семейство Spirochaetaceae
Род Treponema
Вид Treponema pallidum
T.endemicum – возбудитель
беджель T.carateum – возбудитель пинты
T.pertenue – возбудитель фрамбезии
Слайд 4
Фриц Рихард Шаудин (1871-1906)
В 1905 г. немецкие учёные Ф.
Шаудин и Э. Гоффман впервые обнаружили бледную трепонему -
Treponema pallidum
Слайд 5Морфология T.pallidum
Трепонемы (лат. сгибающаяся, вращающаяся нить) – тонкие спиралевидные прокариоты,
Размеры клетки:
длина от 6-14 мкм, толщина 0,25-0,3 мкм,
амплитуда
спирали 0,5х1,0 мкм.,
среднее количество равномерных завитков 8-12.
Снаружи трепонема иногда покрыта слизистым чехлом из кислых полисахаридов - псевдокапсулой,
спор не образует.
Слайд 6Тинкториальные свойства
T. pallidum плохо окрашивается.
Для окрашивания трепонем применяют метод
импрегнации серебром по Морозову или метод Романовского-Гимзы.
Можно изучать нативные препараты
в темном поле зрения.
Слайд 7Метод импрегнации серебром по Морозову
Слайд 8Трепонемы в темном поле зрения
Слайд 9Трепонемы в электронном микроскопе
Слайд 10Культивирование T.pallidum
Бледная трепонема не растет на искусственных питательных средах, ее
культивируют, заражая кроликов-самцов в ткань яичка, где развивается воспалительный процесс
(орхит) и накапливается большое количество вирулентных «тканевых» трепонем.
Слайд 11Периоды заболевания сифилисом
Классическое течение сифилиса в виде первичного, вторичного
и третичного периодов наблюдается у больных при отсутствии лечения.
В
настоящее время сифилис излечивается в первичном или вторичном периоде.
Слайд 12Периоды заболевания сифилисом
Первичный период – твердый шанкр образуется в
области входных ворот инфекции –небольшая эрозия или язва на плотном
основании (безболезненный воспалительный процесс).
В тканевом отделяемом содержится много трепонем. Через 3-4 недели в сыворотке больного появляются антитела.
Слайд 13Периоды заболевания сифилисом
Вторичный сифилис продолжается 2-3 года.
В результате
генерализации инфекции в процесс вовлекаются кровеносные сосуды, лимфатическая система, внутренние
органы, костная система, ЦНС.
Течение рецидивирующее, приступообразное.
На коже и слизистых оболочках появляются различные высыпания, содержащие множество трепонем. Высыпания продолжаются 1,5-2 месяца, затем исчезают и вновь появляются.
Серологические реакции на Ат положительные в течение всего периода.
Слайд 14Периоды заболевания сифилисом
Латентный период – бессимптомный период, может длиться
несколько лет
Слайд 15Периоды заболевания сифилисом
Третичный период – наиболее тяжелый, имеет рецидивирующее
течение, продолжается многие годы. Трепонемы не всегда обнаруживаются. Развивается ГЗТ.
Для этого периода характерны сифилитические гранулемы – гуммы, они склонны к некрозу и распаду, при их заживлении образуются грубые втянутые рубцы и участки склерозированной ткани. Гуммы могут образовываться в любых органах и тканях, в том числе и жизненно важных.
Серологические реакции положительны менее чем у 70% больных.
Слайд 19Микробиологическая диагностика сифилиса
Методы диагностики:
- микроскопический
- серологический
Слайд 20Микробиологическая диагностика сифилиса
Микроскопическое исследование проводят в первичном и вторичном периоде
сифилиса.
Исследуемый материал: отделяемое твердого шанкра, язв, эрозий, содержимое разных высыпаний
на коже или слизистых оболочках и др.
Применяют метод иммунофлюоресценции, реже окрашивают препараты (метод импрегнации).
Слайд 21Антигены T.pallidum
Белковый антиген, высокоиммуногенный, термостабильный. Антитела к нему появляются в
конце инкубационного периода или в течение первой недели после появления
твердого шанкра. Длительно сохраняются после излечивания.
Полисахаридный антиген, слабо иммуногенный, термостабильный. Антитела к нему в диагностике не имеют значения.
Слайд 22Антигены T.pallidum
Липидный «вездесущий» антиген, иммуногенный, на его долю приходится около
30% сухого вещества клетки спирохеты. Имеет сходство с фосфолипидами митохондриальных
мембран тканей человека.
Антитела к нему называются реагинами - они появляются на 5-6 неделе после заражения и исчезают после успешного лечения.
Слайд 23Серологическая диагностика сифилиса
Серологические реакции применяют для выявления Ат.
Они подразделяются
на:
- неспецифические – выявляющие противолипидные Ат (реагины), в них используют
неспецифический кардиолипиновый антиген.
- специфические – в них используют специфические трепонемные антигены.
Слайд 24Серологическая диагностика сифилиса
Серологическая диагностика сифилиса проводится в нашей стране согласно
приказу № 87 МЗ РФ от 26.03.2001 г с применением
следующих тестов:
отборочные (скрининговые) тесты;
подтверждающие тесты.
Слайд 25Отборочные серологические тесты
1. Реакция микропреципитации (РМП) или ее модификации
(РПР и др.)
Их ставят с кардиолипиновым антигеном для
- подтверждения свежего сифилиса
- контроля эффективности лечения.
2. РПГА и ИФА - со специфическими трепонемными АГ , применяются как отборочные при исследовании лиц из групп риска, беременных и доноров.
Слайд 26Механизм реакции микропреципитации (РМП) с кардиолипиновым антигеном
Слайд 27Подтверждающие серологические тесты
1. РПГА (РНГА) – реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации
2.
ИФА – иммуноферментный анализ
3. Иммуноблотинг – при сомнительном результате РПГА
или ИФА
Слайд 28Реакция непрямой гемагглютинации со специфическим трепонемным антигеном
Слайд 29Схема ИФА для определения IgM
Субстрат +
и
хромоген
Слайд 30Подтверждающие серологические тесты
Эти реакций ставят в специализированных институтах и в
качестве антигена используют живые тканевые T.pallidum штамма Никольс .
МИФ –
метод иммунофлюоресценции непрямой
РИТ – реакция иммобилизации трепонем
Слайд 31Метод иммунофлюоресценции непрямой
Слайд 32ПЦР – полимеразная цепная реакция.
Метод заключается в многократном увеличении количества
ДНК диагностируемого микроорганизма.
С помощью данного анализа можно выявить
врожденный сифилис,
нейросифилис,
первичный серонегативный сифилис,
обнаружить сифилис у ВИЧ-инфицированных.
Подготовка к сдаче и время сдачи:
забор крови производится натощак в количестве 5-6 мл из локтевой вены.
Слайд 34Биопрепараты для специфической профилактики и лечения
Специфическая профилактика и лечение
не
разработаны.
Слайд 35ГОНОРЕЯ
Гонорея – антропонозное венерическое заболевание, характеризующееся воспалением слизистых оболочек преимущественно
урогенитальной системы, часто приобретает хроническое течение.
Слайд 36Таксономическое положение возбудителя гонореи
Семейство Neisseriaceae
Род Neisseria
Вид
Neisseria gonorrhoeae (N.gonorrhoeae)
Слайд 37Альбер Людвиг Нейссер (1855-1916)
В 1879 г. немецкий врач-дерматолог А. Нейссер
впервые обнаружил возбудителя гонореи - Neisseria gonorrhoeae
Слайд 38Морфология N.gonorrhoeae
Грамотрицательные диплококки бобовидной формы,
размеры 1,0-1,3 х 0,6-0,8 мкм,
неподвижные,
спор не образуют,
имеют пили,
в организме образуют нежную
капсулу
Слайд 39Гонококк в гное, окраска по Леффлеру (метиленовым синим) и по
Граму
Слайд 40Культуральные свойства гонококков
Растут на питательных средах с добавлением
крови, сыворотки, асцитической жидкости
Слайд 42Пути заражения
Пути заражения гонококками:
половой,
вертикальный
Слайд 44Микробиологическая диагностика гонореи
Исследуемые материалы: гной из уретры, слизь из шейки
матки, отделяемое других пораженных слизистых оболочек, осадок мочи, пунктат из
суставов (при артрите), кровь.
Методы диагностики
1. Микроскопический.
2. Бактериологический.
3. Серологические тесты для выявления Аг гонококка в клиническом материале – МИФ, ИФА.
4. Полимеразная цепная реакция – ПЦР.
Слайд 45Микроскопическая диагностика острой гонореи
Исследуемый материал (гной из уретры) красят по
Граму и Лёффлеру.
При положительном результате в поле зрения препарата
видны многочисленные лейкоциты и диплококки бобовидной формы, расположенные преимущественно внутри лейкоцитов.
При свежей острой гонорее этот метод является окончательным.
Слайд 46Микроскопический метод диагностики
Слайд 48Бактериологический метод диагностики гонореи
Исследуемый материал засевают на элективные питательные среды
в чашки Петри, инкубируют при 37° С в атмосфере 10%
СО2 2-5 суток. Выросшие колонии напоминают капли росы (вирулентные штаммы). Далее получают чистую культуру, которую идентифицируют по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам, определяют чувствительность к антибиотикам.
Слайд 49Биопрепараты для специфической профилактики и лечения гонореи
Гонококковая вакцина – инактивированная
вакцина, лечебная
Слайд 50Урогенитальный хламидиоз
Урогенитальный хламидиоз
антропонозное инфекционное заболевание,
(возбудитель - Chlamydia trachomatis)
передающееся половым путем и характеризующееся многочисленными поражениями разных органов и
тканей мочеполовой системы, часто приобретает хроническое течение.
Слайд 51Станислав Провачек
Польский учёный Станислав Провачек впервые обнаружил хламидии в
1907 году.
Слайд 52Таксономическое положение хламидий
порядок Chlamydiales
семейство Chlamydiaceae
род Chlamydia
вид Chlamydia trachomatis (C.trachomatis)
УГС C.trachomatis
– серовары D, Da, E, F, G, H, I, Ia,
J, K.
род Chlamydophila
Слайд 53Морфология хламидий
Хламидии – мелкие грамотрицательные прокариоты шаровидной или овоидной формы,
не образуют спор, неподвижны, не имеют капсулы. В составе клеточной
стенки отсутствует пептидогликан, ригидные функции выполняют белки наружной мембраны.
Хламидии существуют в двух формах:
Элементарное тельце (0,2-0,3 мкм) – внеклеточная инфекционная форма, ответственная за процесс прикрепления к клетке-мишени и проникновение в них.
Ретикулярное тельце (0,8-1,5 мкм)- внутриклеточная метаболически активная форма
Слайд 54Методы изучения хламидий
Хламидии окрашиваются по методу Романовского-Гимзы. Цвет окраски зависит
от стадии жизненного цикла:
ЭТ окрашивается в пурпурный цвет и четко
выделяется на голубом фоне цитоплазмы клетки-мишени,
РТ окрашивается в голубой цвет.
Слайд 55Внутриклеточное включение при хламидиозе
Слайд 56Культивирование хламидий
Хламидии являются облигатными внутриклеточными энергетическими паразитами, не способны к
синтезу АТФ, поэтому не растут на искусственных питательных средах.
Хламидии
культивируют в культуре клеток HeLa, McCoy и в желточных мешках куриных эмбрионов.
Слайд 57Однослойная культура клеток после инкубирования в присутствии Chlamydia trachomatis. Цитплазма
инфицированных клеток выглядит «гранулированной».
Слайд 58Жизненный цикл хламидий – (продолжительность 48-72 часа)
1.Адсорбция ЭТ на мембране
клетки мишени и внедрение по типу эндоцитоза с образованием фагоцитарной
вакуоли (7-10 часов).
2.Преобразование ЭТ в более крупное РТ, которое многократно делится бинарно, образуя хламедийные включения, окруженные мембраной клетки-хозяина (18-24 часа).
3.Созревание хламидий – образование промежуточных телец и трансформация РТ в ЭТ (36-42 часа).
4.Выход ЭТ из разрушенной клетки.
5.Проникновение ЭТ в новые клетки и начало нового цикла развития
Слайд 60патогенез
ЭТ, внедряясь в клетку, использует для роста и размножения клеточную
АТФ и через 6-8 часов превращается в РТ.
После инфицирования, через
18-22 ч. (РТ превр. в ЭТ)
Слайд 61патогенез
В результате размножения C. trachomatis в инфицированных эпителиальных клетках развивается
воспалительный процесс, выраженность которого зависит от состояния местного и общего
специфического и неспецифического иммунитета организма.
После инвазии хламидий образуется комплемент, который приводит к стимуляции гранулоцитов. Воспалительная реакция сопровождается локальной гибелью клетки и разрушением ткани, что дополняется высвобождением фосфолипазы А² и простагландинов, это приводит к отеку и гиперемии слизистой оболочки, нарушению целостности эпителиального слоя с частичной десквамацией эпителия.
Слайд 62патогенез
Превращение РТ в ЭТ требует не только энергии, но зависит
от присутствия биологических субстратов, среди которых важнейшее место занимает аминокислота
триптофан.
В процессе воспаления лимфоциты выделяют разнообразные цитокины (в т. ч интерферон g), который индуцирует клеточный фермент индоламин-диоксигеназу (ИДО), разрушающий триптофан. Уменьшение триптофана приводит или к гибели хламидий, или к замедлению процессов репликации (клеточного деления), и в эпителиальной клетке начинают накапливаться неинфекционные, неделящиеся РТ.
Слайд 63патогенез
Цикл развития хламидий приостанавливается, но, несмотря на неблагоприятные условия, РТ
сохраняют свою жизнеспособность (персистируют).
Дальнейшее развитие и исход этого состояния
зависят от продолжительности и уровня содержания триптофана.
Уменьшение содержания интерферона g и, соответственно, увеличение внутриклеточного пула триптофана приводят к редифференцировке персистирующих форм в инфекционные ЭТ, их выходу из клетки и продолжению инфекционного процесса.
Хламидии могут высвобождаться из инфицированной клетки, сохраняя жизнеспособность клетки (при выходе ЭТ путем экзоцитоза), что приводит к бессимптомному течению.
Слайд 64Внутриклеточное включение, содержащее размножающиеся хламидии
При возникновении неблагоприятных биохимических условий продолжительность
жизненного цикла может значительно увеличиваться.
Слайд 66Антигены хламидий (по Р.A. Mardh, 1990)
Слайд 68Иммунитет
Защитная реакция на начальной стадии инфекции осуществляется полиморфоядерными лимфоцитами
Существенную роль
в защите организма играет поликлональная активация В-лимфоцитов. В сыворотке крови
и секреторных жидкостях при хламидиозе обнаруживают значительное количество иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA к хламидийному липополисахаридному антигену.
Показано локальное образование секреторного иммуноглобулина А;
Ведущую роль в защите от хламидийной инфекции занимают Т-хелперы, активирующие фагоцитарную активность макрофагов и цитотоксическую защиту посредством Т-лимфоцитов;
Слайд 69Микробиологическая диагностика урогенитального хламидиоза
Исследуемый материал: соскобы эпителия слизистых уретры, цервикального
канала, сыворотка крови.
Методы диагностики:
Метод иммунофлюоресценции прямой
ПЦР – самый чувствительный метод
исследования
Серологический – выявляют специфические антитела в сыворотке больных в РНГА, ИФА, МИФ непрямой.
Культуральный метод – трудоемкий и длительный, используют культуры клеток.
Слайд 70Транспортная система для хранения клинического материала (до 72 час.)
при
диагностике урогенитального хламидиоза
Слайд 71ПЦР в диагностике урогенитального хламидиоза – механизм ПЦР
Слайд 72C.trachomatis в пораженных клетках методом прямой иммунофлюоресценции – зеленые включения
Слайд 73Метод иммунофлюоресценции
Элементарные тельца хламидий (ярко зеленый цвет) в человеческой сперме
(Courtney S.)
Слайд 74ИФА схема исследования для диагностики хронического урогенитального хламидиоза
Слайд 75Культуральный метод
Элементарные тельца C.trachomatis светят-ся зеленовато-желтым цветом. Эпителиальные клетки –
хозяина характеризуются красным цветом.
(Х. Хансфилд)
Слайд 76Биопрепараты для специфической профилактики и лечения урогенитального хламидиоза
Не разработаны
Слайд 77микплазмозы
Антропонозные инфекции, часто протекающие бессимптомно.
Слайд 78Таксономическое положение микоплазм
класс Mollicutes
Патогенные микоплазмы включены в подсемейство Mycoplasmataceae:
содержит
2 рода: Mycoplasma и Ureaplasma.
Виды:
респираторные - M.pneumoniae
урогенитальные - M.hominis,
M.genetalium, U.urealiticum
Слайд 79Морфология микоплазм
поверхностная оболочка микоплазм представлена ЦПМ. Она более прочная чем
у бактерий, что связано с присутствием в ней холестерина;
не имеют
мезосом;
имеют самый маленький размер генома среди всех саморепродуцирующихся живых клеток – 0,4–0,5х109 Д (у бактерий - 1-3х109 Д).
вокруг крупных форм иногда образуется мукозный слой, подобный капсуле (липидный,полисахаридный или липополисахаридный)
Слайд 81Морфологические формы микоплазм
Микоплазмы лишены ригидной клеточной стенки (формообразующей структуры), поэтому
они полиморфны:
-крупные шаровидные тела диаметром до 10 мкм.;
-мелкие зерна «элементарные
тельца» меньше 0,1-0,2 мкм.;
-нитевидные, иногда ветвящиеся формы, подобные мицелиям – длинной до 150 мкм диаметром до 0,3 мкм.;
-грушевидные, элипсоидные, гантелевидные, шаровидные, палочковидные – различных размеров.
Слайд 83Методы микроскопического изучения микоплазм
Микоплазмы слабо окрашиваются анилиновыми красителями, их можно
окрасить методом Романовского-Гимзы.
Чаще микоплазмы изучают в нативных препаратах, применяя
фазово-контрастную микроскопию. В препаратах видна гетерогенность популяции по размерам, форме, оптической плотности.
Слайд 84Роль микоплазм в патологии человека
Урогенитальные микоплазмы (M.hominis, M.genetalium, U.urealiticum) часто
вызывают хронические заболевания (негонокковый уретрит, спонтанные аборты, бесплодие) у 25-80%
людей, ведущих активную половую жизнь.
M.incognitos выделяется при генерализованных процессах.
Слайд 86UREAPLASMA urealyticum
Морфология, ультраструктура и способы размножения сходны с другими
микоплазмами.
Оптимальная температура 36,5-37 °С
оптимальный рН 6,5-7,0. При незначительном защелачивании
среды клетки быстро погибают.
Уреаплазмы инертны к сахарам
каталаза-отрицательны.
Проявляют β-гемолитическую активность по отношению к эритроцитам кролика и морской свинки.
Секретируют фосфолипазы А1, А2, С. а также протеазы, селективно действующие на молекулы IgA.
Культуральные свойства.
В жидких питательных средах растут плохо; предпочтителен пoceв на плотные обогащенные среды. Для роста нуждаются в создании газовой среды, включаюшей 5% С02 и 95% N2 либо 5% 02, 10% С02 и 85% N2.
Слайд 87Эпидемиология
Резервуар возбудителя – больной человек;
основной путь передачи – воздушно
– капельный. Заболевание регистрируют повсеместно.
К заражению наиболее чувствительны подростки
в возрасте 5-15 лет.
у детей младше 6 мес. инфекции выявляют редко.
Пик заболеваемости – конец лета и первые осенние месяцы.
Слайд 88Клинические проявления
У мужчин Ureaplasma urealyticum вызывает уретриты и уреаплазменные простатиты.
У женщин инфекция обычно протекает стёрто; обострения могут провоцироваться присоединившимися
инфекциями.
Проникновение возбудителя в верхние отделы женской половой системы реализуется через сперматозоиды (носители уреаплазм). Колонизация эндометрия часто приводит к самопроизвольным абортам.
Проникновение уреаплазм в более глубокие отделы мочеполового тракта вызывает я, например острый уретральный синдром.
Доказана роль уреаплазм в развитии мочекаменной болезни, обусловленной действием бактериальной уреазы.
Слайд 89Роль микоплазм в патологии человека
Микоплазмы являются «мембранными паразитами».
Они прочно
прикрепляются к мембране клеток, усваивая через мембрану необходимые питательные вещества,
воздействуя при этом своими токсическими продуктами метаболизма на клетку-хозяина.
Эпителиоциты повреждаются, нарушается их жизнедеятельность, но они не погибают.
Слайд 90Микробиологическая диагностика.
Особенности метаболизма уреаплазм позволяют легко дифференцировать их от
прочих микоплазм по способности секретировать уреазу. В настоящее время метод
определения уреазной активности (образование аммиака из мочевины) — основной способ диагностики уреаплазмозов.
Серодиагностика –ИФА
ПЦР
Слайд 91Лечение и профилактика.
Препараты выбора — тетрациклины, макролиды и фторхинолоны.
Профилактика урогенитальных микоплазмозов аналогична методам предупреждения прочих венерических заболеваний.